miR-6509-3p调控EMT进程促进肝癌细胞迁移和侵袭

摘要

目的 探讨miR-6509-3p是否通过上皮细胞-间充质转化（epithelial-mesenchymal transition,EMT）影响肝癌细胞侵袭和迁移。方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应（real-time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction,qRT-PCR）检测2024年1月至2025年1月在联勤保障部队第988医院普通外科行肝癌切除术的92例患者肝癌组织和癌旁组织中miR-6509-3p表达情况，分析临床病理特征与miR-6509-3p表达水平的关系。同时，检测miR-6509-3p在多株肝癌细胞的表达情况。在MHCC97-H中干扰miR-6509-3p表达，而HepG2过表达miR-6509-3p，设置相应的对照组。细胞毒实验（methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT）和EdU检测各组细胞增殖能力；细胞划痕和Transwell实验检测细胞迁移和侵袭；免疫印迹试验（Western blot）检测各组细胞中E-cadherin、 N-cadherin和snail蛋白表达情况。生物信息学预测miR-6509-3p与SLCO1B3结合。qRT-PCR检测92例肝癌组织中SLCO1B3 mRNA的表达，并分析其与miR-6509-3p的相关性。双荧光素酶报告实验和RNA免疫沉淀（RNA immunoprecipitation,RIP）实验进一步验证二者的结合。在回复实验中设置SLCO1B3干扰组，观察对肝癌细胞增殖、迁移、侵袭能力影响和EMT相关蛋白表达的变化。结果 肝癌组织中miR-6509-3p表达明显高于癌旁组织（P<0.001），且与肿瘤大小、分化程度、微血管癌栓方面均显著相关（P<0.05）。过表达miR-6509-3p可促进肝癌细胞增殖、迁移和侵袭（P<0.001），伴随E-cadherin蛋白表达降低（P<0.001）,N-cadherin和snail蛋白表达增加（P<0.01），干扰miR-6509-3p后产生了相反的作用效果（P<0.01）。在肝癌组织中miR-6509-3p与SLCO1B3 mRNA表达呈显著负相关（P<0.001）。miR-6509-3p靶向结合SLCO1B3。干扰SLCO1B3可以逆转miR-6509-3p inhibitor对肝癌细胞增殖，侵袭、迁移和EMT相关蛋白表达的影响（P<0.01）。结论 miR-6509-3p在肝癌细胞和组织中高表达，其可促进肝癌细胞增殖，侵袭和迁移，促进EMT过程，可能通过miR-6509-3p/SLCO1B3轴发挥作用。

关键词

miR-6509-3p / 肝细胞癌 / 增殖 / 上皮间质转化 / SLCO1B3

基金资助

河南省自然科学基金(252300421639)