miR-21-5p抑制SIRT2/AKT轴促进骨关节炎进展机制

摘要

目的 探索miR-21-5p通过调控SIRT2/AKT信号轴在骨关节炎（osteoarthritis,OA）进展中的作用机制。方法 采用10 ng/mL IL-1β诱导人软骨细胞系CP-H107构建OA体外模型。实验分组包括：IL-1β+阴性对照模拟物（NC mimic）组、IL-1β+miR-21-5p模拟物（mimic）组、IL-1β+阴性对照抑制物（NC inhibitor）组、IL-1β+miR-21-5p抑制物（inhibitor）组及IL-1β+miR-21-5p mimic+oe SIRT2组。通过RT-qPCR、 Western blot(WB)、免疫荧光检测MMP13、SIRT2、AKT及p-AKT表达水平，Annexin V-FITC/PI流式细胞术分析细胞凋亡，ELISA检测IL-6、TNF-α、IL-10水平。双荧光素酶报告实验验证miR-21-5p与SIRT2的靶向结合。结果 IL-1β刺激后，CP-H107细胞中miR-21-5p及MMP13表达显著升高（P<0.05）。miR-21-5p过表达可促进MMP13表达、细胞因子（IL-6、TNF-α、IL-10）分泌及细胞凋亡（P<0.05），而抑制miR-21-5p可产生相反效果（P<0.05）。双荧光素酶实验证实miR-21-5p可直接靶向SIRT2。miR-21-5p过表达显著下调SIRT2及pAKT/AKT比值（P<0.05）。进一步实验显示，SIRT2过表达可部分逆转miR-21-5p过表达所致的MMP13上调、炎症因子释放及凋亡增加（P<0.05）。结论 miR-21-5p通过靶向抑制SIRT2，阻断其对AKT通路的调控作用，促进软骨细胞分解代谢、炎症反应及凋亡，加速OA进展。

关键词

miR-21-5p / SIRT2 / 蛋白激酶B / 骨关节炎

基金资助

组织移植安徽省重点实验室开放研究基金（AHTT2023B002）; 蚌埠医科大学科技项目自然科学重点项目（2023byzd050）; 安徽省高校科研项目自然科学重点项目（2022AH051451;2023AH051914）