基于Wnt/β-catenin信号通路探讨推法对骨骼肌过劳性损伤大鼠的影响及作用机制

摘要

目的 观察推法对骨骼肌过劳性损伤大鼠修复再生的影响，基于Wnt/β-catenin信号通路探讨其作用机制。方法 选择42只SD大鼠按随机数字表法分为空白组、模型组和干预组，每组14只。除空白组外，模型组、干预组参考Armstong离心运动方案训练建立大鼠骨骼肌过劳性损伤模型。空白组、模型组右后肢腓肠肌及相邻肌肉部位涂抹医用级凡士林，但不予推法干预；干预组右后肢腓肠肌部位进行推法干预（压力约为2 N、频率80次/min,3 min/次，每天上午、下午各干预1次，共持续3 d）。分别于造模结束后24 h和干预结束后24 h采用平衡木测试评估大鼠骨骼肌损伤后的运动功能；苏木精-伊红染色法（HE）观察腓肠肌的病理学改变；采用EM-1400型透射电子显微镜观察骨骼肌纤维超微结构；采用荧光定量PCR仪检测肌源性调节因子成肌分化抗原（MyoD）、肌肉生成素（MyoG）和配对盒转录基因7(Pax7) mRNA转录水平；采用Western blot法检测MyoD、MyoG、Pax7、Wnt3a、Axin2和β-catenin蛋白表达水平。结果 (1)运动功能：与空白组比较，模型组、干预组平衡木通过时间、滑爪次数均明显增加，差异均具有统计学意义（P<0.05）；与模型组比较，干预组干预后平衡木通过时间、滑爪次数均明显减少，差异均具有统计学意义（P<0.05）。(2)腓肠肌组织病理学改变：模型组腓肠肌内大量的肌细胞内可见裂纹，肌原纤维断裂；与模型组比较，干预组腓肠肌组织损伤程度减轻，可见肌纤维形态规则，排列整齐。(3)腓肠肌组织超微结构改变：模型组局部肌原纤维束断裂、溶解，少量Z线结构溶解、模糊；与模型组比较，干预组腓肠肌细胞轻微水肿，肌原纤维束结构清晰，部分肌原纤维束断裂，Z线结构清晰、排列较整齐。(4)腓肠肌组织MyoD、MyoG、Pax7 mRNA转录水平：与空白组比较，模型组和干预组MyoD、MyoG、Pax7 mRNA转录水平均明显更高（P<0.05）；与模型组比较，干预组MyoD、MyoG、Pax7 mRNA转录水平均明显更高（P<0.05）。(5)腓肠肌组织MyoD、MyoG、Pax7蛋白表达水平：与空白组比较，模型组和干预组的MyoD、MyoG、Pax7蛋白表达水均明显更高（P<0.05）；与模型组比较，干预组MyoD、MyoG、Pax7蛋白表达水平均明显更高（P<0.05）。(6)腓肠肌组织Wnt3a、Axin2、β-catenin蛋白表达水平：与空白组比较，模型组和干预组Wnt3a、Axin2、β-catenin蛋白表达水平均明显更高（P<0.05）；与模型组比较，干预组Wnt3a、Axin2、β-catenin蛋白表达水平明显更高（P<0.05）。结论 推法可改善过劳性损伤模型大鼠腓肠肌损伤和运动功能，其机制可能与激活Wnt/β-catenin信号通路有关。

关键词

过劳性损伤 / 骨骼肌 / 修复再生 / 运动功能 / 推法 / Wnt/β-catenin信号通路