基于脊髓背角5-羟色胺及其受体调控途径探讨腕踝针治疗神经病理性疼痛的作用机制

摘要

目的 探讨腕踝针通过调控脊髓背角5-羟色胺（5-HT）及其受体治疗神经病理性疼痛（NP）的作用机制。方法 选择清洁级雄性SD大鼠78只，适应性喂养1周后按随机数字表法分为假手术组、模型组、腕踝针组、5-HT_1AR拮抗剂组、5-HT_2AR拮抗剂组和5-HT₃R拮抗剂组，每组分别18、18、18、8、8、8只。除假手术组外，其余5组大鼠均构建慢性缩窄性损伤（CCI）大鼠模型。CCI术后第7天开始对腕踝针组、5-HT_1AR拮抗剂组、5-HT_2AR拮抗剂组及5-HT₃R拮抗剂组进行腕踝针干预，1次/d，持续7 d；假手术组和模型组同等抓取不进行针刺干预。CCI术后第9、11、13天，5-HT_1AR拮抗剂组、5-HT_2AR拮抗剂组及5-HT₃R拮抗剂组在腕踝针干预前30 min分别注射WAY-100635、Ketanserin、Ondansetron拮抗剂。分别于术前、术后第7天和术后第14天评估大鼠痛行为学[机械痛阈值（PWT）和热痛潜伏期（PWL）]；采用免疫荧光技术检测中缝背核（DRN）内色氨酸羟化酶-2（TPH-2）表达水平；采用荧光显微镜观察脊髓背角胶质细胞标记物[小胶质细胞标志物（Iba-1）、胶质纤维酸性蛋白（GFAP）]；采用ELISA法检测脊髓背角5-HT及其受体(5-HT_1AR、5-HT_2AR、5-HT₃R)表达水平；采用qRT-PCR检测脊髓背角炎症因子白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）mRNA转录水平。结果 （1）痛行为学：与假手术组比较，模型组术后第7、14天PWT和PWL均明显降低（P<0.05）；与模型组比较，腕踝针组术后第14天PWT和PWL均明显升高（P<0.05）；与腕踝针组比较，5-HT_1AR拮抗剂组和5-HT₃R拮抗剂组术后第14天PWT和PWL均明显降低（P<0.05）,5-HT_2AR拮抗剂组术后第14天PWT明显降低（P<0.05）,PWL差异无统计学意义（P>0.05）。（2） TPH-2表达及5-HT水平：与假手术组比较，模型组中缝背核TPH-2表达水平、脊髓背角5-HT水平均明显升高（P<0.05）；与模型组比较，腕踝针组中缝背核TPH-2表达水平、脊髓背角5-HT水平均明显降低（P<0.05）。（3） 5-HT受体表达水平：与假手术组比较，模型组脊髓背角5-HT_1AR、5-HT₃R受体表达水平均明显降低（P<0.05）,5-HT_2AR受体表达水平明显增加（P<0.05）。与模型组比较，腕踝针组5-HT_1AR、5-HT₃R受体表达水平均明显增加（P<0.05），而5-HT_2AR受体表达水平明显降低（P<0.05）。（4） Iba-1、GFAP阳性率：与假手术组比较，模型组脊髓背角Iba-1、GFAP阳性率均明显升高（P<0.05）；与模型组比较，腕踝针组Iba-1、GFAP阳性率均明显降低（P<0.05）；与腕踝针组比较，5-HT_1AR拮抗剂组、5-HT₃R拮抗剂组Iba-1、GFAP阳性率均明显升高（P<0.05）,5-HT_2AAR拮抗剂组Iba-1、GFAP差异均无统计学意义（P>0.05）。（5） IL-1β、TNF-α mRNA转录水平：与假手术组比较，模型组脊髓背角IL-1β、TNF-α mRNA转录水平均明显升高（P<0.05）；与模型组比较，腕踝针组脊髓背角IL-1β、TNF-α mRNA转录水平均明显降低（P<0.05）；与腕踝针组比较，5-HT_1AAR拮抗剂组和5-HT₃R拮抗剂组IL-1β、TNF-α mRNA转录水平均明显升高（P<0.05）,5-HT_2AAR拮抗剂组IL-1β、TNF-α mRNA转录水平差异均无统计学意义（P>0.05）。结论 腕踝针可以改善CCI模型大鼠痛觉过敏，其作用机制可能与降低中缝背核（DRN）内TPH-2的活性，调节脊髓背角5-HT及其受体，抑制小胶质细胞激活发挥抗炎作用有关。

关键词

神经病理性痛 / 腕踝针 / 中缝背核 / 脊髓背角 / 5-羟色胺

基金资助

国家自然科学基金面上项目(82274658); 福建省自然科学基金项目(2023J01333); 福建省卫生健康委员会医学创新课题(2022CXA053); 福建省中青年教师教育科研项目(JAT220116)