基于肠道菌群-Th17/Treg轴探讨电针对卵巢切除大鼠骨代谢的影响

摘要

目的 观察电针脾俞穴、肾俞穴对双侧去卵巢大鼠肠道菌群、Th17/Treg细胞与骨代谢的影响，探讨电针调节绝经后骨质疏松症（PMOP）大鼠骨代谢与肠道菌群-Th17/Treg轴的内在联系。方法 选择SPF级3月龄雌性SD大鼠20只，采用双侧卵巢切除（OVX）法构建PMOP大鼠模型，并采用随机数字表法将其分为模型组和电针组，每组10只。电针组造模3 d后开始电针治疗；模型组每天进行与电针组一样的抓取动作，不做其他任何干预治疗。2组在干预12周后，次日清晨每只大鼠先采集1 g左右粪便样本放入无菌EP管并保存于-80℃冰箱，再以2%戊巴比妥钠（0.2 mL/100 g的剂量）经腹腔注射麻醉，处死取材进行后续实验。采用ELISA法检测雌激素（E₂）水平；16s rDNA技术检测2组粪便样品的肠道菌群，进行菌群表征指数分析、菌群差异分析和LEfSe多级物种差异判别分析；流式细胞术检测结肠系膜淋巴结中Th17细胞和Treg细胞的含量；ELISA法检测Ⅰ型原胶原N端前肽（PⅠNP）、β胶原降解产物（β-CTx）、白细胞介素-17（IL-17）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、羟基维生素D₃（25-OH-D₃）和白细胞介素-10（IL-10）、转化生长因子-β（TGF-β）等骨代谢相关生化指标；双能X线骨密度仪检测骨密度。结果 与模型组比较，电针组外周血E₂含量增加（P<0.05）。与模型组比较，电针组肠道微生物组健康指数（GMHI）明显升高（P<0.05）；与模型组比较，电针组肠道菌群失调指数（MDI）值明显下降（P<0.05）；与模型组比较，电针组肠道菌群中乳杆菌属和双歧杆菌属的丰度均升高（P<0.05）；与模型组比较，电针组肠道中明显富集双歧杆菌属和乳杆菌属等有益菌（P<0.05）。与模型组比较，电针组结肠淋巴结中Th17细胞含量明显减少（P<0.05）；与模型组比较，电针组结肠淋巴结中Treg细胞含量明显增加（P<0.05）。与模型组比较，电针组PⅠNP、β-CTx、IL-17、IL-6和TNF-α表达水平均降低（P<0.05）;25（OH）D₃、IL-10和TGF-β表达水平均升高（P<0.05）。与模型组比较，电针组骨密度增强（P<0.05）。结论 电针脾俞穴、肾俞穴可提高E₂水平，上调双歧杆菌属和乳杆菌属这2类有益菌的丰度，调节肠道菌群-Th17/Treg轴，有效改善雌激素缺乏导致的骨代谢失衡，防治PMOP。

关键词

绝经后骨质疏松症 / 肠道菌群 / Th17/Treg轴 / 骨代谢 / 电针