清解扶正颗粒调控Cathepsin B/NLRP3通路减轻大肠癌小鼠5-FU化疗性肠黏膜炎的机制研究

摘要

目的 基于Cathepsin B/NLRP3通路探讨清解扶正颗粒对大肠癌小鼠经5-氟尿嘧啶（5-FU）化疗后所致的肠黏膜炎的治疗作用及作用机制。方法 24只雄性BALB/c小鼠采取右前肢腋部皮下接种CT26细胞的方法构建大肠癌皮下移植瘤小鼠模型，待瘤体生长至100～300 mm3时，按照瘤体体积大小将小鼠随机分为对照组、5-FU组、5-FU+清解扶正颗粒组（5-FU+QFG组），每组8只。对照组给予生理盐水灌胃和腹腔注射，其他2组小鼠腹腔注射5-FU[50 mg/（kg·d-1）]，每日1次，连续5 d;5-FU+QFG组在化疗的同时灌胃给予清解扶正颗粒（1.0 g/kg·d-1），每日1次，连续7 d。每天观察小鼠的腹泻情况，记录体质量及瘤体积等情况。第7天末次给药后禁食12 h，动物取材，进行实验检测。采用苏木精-伊红染色（HE）法观察小鼠空肠组织病理变化；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测3组小鼠血清中二胺氧化酶（DAO）、D-乳酸（DLA）、内毒素（ET）、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)表达水平；采用免疫组织化学法检测空肠组织中组织蛋白酶B(Cathepsin B)的阳性表达；采用实时定量聚合酶链式反应（qPCR）检测空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA的相对表达水平，采用Western blot法检测空肠组织中ZO-1、Occludin、Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白的相对表达量。结果 (1)小鼠一般情况：在实验周期内，清解扶正颗粒能够显著减轻5-FU化疗引起的腹泻症状（P<0.05），对5-FU化疗引起的体质量下降无显著改善（P>0.05），对5-FU抑制瘤体生长没有显著的协同效应（P>0.05）。(2)空肠组织病理变化：清解扶正颗粒可显著改善5-FU化疗引起的肠黏膜绒毛变短、隐窝变深、炎性细胞浸润等肠黏膜损伤症状。(3)血清DAO、D-LA、ET以及TNF-α、IL-1β、IL-6含量：与5-FU组比较，清解扶正颗粒可以显著降低大肠癌小鼠血清中DAO、D-LA、ET以及促炎细胞因子TNF-α、IL-1β、IL-6的含量（P<0.05）。(4)空肠组织Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白相对表达量：与5-FU组比较，清解扶正颗粒显著降低空肠组织中Cathepsin B、NLRP3、ASC、cleaved Caspase-1蛋白相对表达量（P<0.05）。(5)空肠组织ZO-1、Occludin mRNA转录水平和蛋白表达水平：与5-FU组比较，清解扶正颗粒显著增加空肠组织中紧密连接蛋白ZO-1、Occludin mRNA和蛋白相对表达量（P<0.05）。结论 清解扶正颗粒通过调控Cathepsin B/NLRP3信号通路，减少促炎细胞因子释放，抑制肠黏膜炎症反应，修复肠黏膜屏障损伤，从而减轻5-FU引起的化疗性肠黏膜炎。

关键词

大肠癌 / Cathepsin B/NLRP3通路 / 肠黏膜炎 / 5-氟尿嘧啶 / 清解扶正颗粒