基于AMPK/mTOR通路调控氧化应激探讨电针治疗原发性痛经大鼠的作用机制

摘要

目的 探讨电针三阴交穴对原发性痛经（PDM）模型大鼠疼痛症状及子宫组织损伤的影响，并分析其潜在的作用机制。方法 选取60只SPF级雌性SD大鼠，按随机数字表法分为空白组、模型组、假电针组、电针组和药物组，每组12只。空白组不做干预，其余4组均通过苯甲酸雌二醇联合缩宫素制备周期性PDM大鼠模型。从造模第4天起，电针组电针双侧三阴交穴，25 min/次，1次/d，持续5 d；空白组和模型组进行抓取捆绑处理，不进行干预；假电针组于双侧三阴交穴旁开2 mm处针刺，留针25 min/次，1次/d，持续5 d；药物组给予布洛芬灌胃治疗，1次/d，持续5 d。干预结束后，采用动物行为学评估法评估大鼠疼痛反应；采用HE染色法对大鼠子宫组织进行病理学变化分析；采用酶联免疫吸附试验（ELASA）法检测大鼠血清中前列腺素E₂（PGE₂）、前列腺素F₂α（PGF₂α）、超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽过氧化酶（GSH-Px）含量；采用二氢乙啶（DHE）免疫荧光探针活性氧（ROS）染色法检测大鼠子宫组织ROS含量；采用蛋白质印迹技术（WB）分析大鼠子宫组织中腺苷酸激活蛋白激酶（AMPK）、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）及其磷酸化形式的表达水平。结果 （1）行为学指标：与空白组比较，模型组、假电针组、电针组和药物组干预后扭体评分、扭体次数和扭体潜伏期均明显升高（P<0.05）。与模型组比较，电针组和药物组干预后扭体评分、扭体次数均明显更低（P<0.05），扭体潜伏期均明显更长（P<0.05）。与假电针组比较，电针组和药物组干预后扭体评分、扭体次数均明显更低（P<0.05），扭体潜伏期均明显更长（P<0.05）。（2）子宫组织病理损伤评分：与空白组比较，模型组和假电针组干预后子宫组织病理损伤评分均明显增加（P<0.05）。与模型组比较，电针组和药物组干预后子宫组织病理损伤评分均明显降低（P<0.05）。与假电针组比较，电针组和药物组干预后子宫组织病理损伤评分均明显降低（P<0.05）。（3） PGE₂、PGF₂α、SOD、MDA和GSH-Px含量：与空白组比较，模型组、假电针组干预后血清PGE₂、SOD和GSH-Px含量均明显更低（P<0.05）,MDA、PGF₂α含量和PGF₂α/PGE₂均明显更高（P<0.05）；电针组和药物组干预后PGF₂α含量和PGF₂α/PGE₂均明显更高（P<0.05）。与模型组比较，电针组和药物组干预后血清PGE₂、SOD和GSH-Px含量均明显更高（P<0.05）,PGF₂α、MDA含量和PGF₂α/PGE₂均明显更低（P<0.05）。与假电针组比较，电针组和药物组干预后血清PGE₂、SOD和GSH-Px含量均明显更高（P<0.05）,PGF₂α、MDA含量和PGF₂α/PGE₂均明显更低（P<0.05）。（4） ROS表达水平：与空白组比较，模型组、假电针组、电针组和药物组干预后子宫组织ROS含量均明显更高（P<0.05）。与模型组比较，电针组和药物组干预后子宫组织ROS含量均明显更低（P<0.05）。与假电针组比较，电针组和药物组干预后子宫组织ROS含量明显更低（P<0.05）。（5） AMPK、mTOR、p-AMPK、pmTOR蛋白表达水平：与空白组比较，模型组干预后子宫组织p-AMPK/AMPK明显更高（P<0.05）,pmTOR/mTOR明显更低（P<0.05）。与模型组比较，电针组与药物组干预后子宫组织p-AMPK/AMPK均明显更低（P<0.05）,p-mTOR/mTOR均明显更高（P<0.05）。与假电针组比较，电针组和药物组干预后子宫组织p-AMPK/AMPK均明显更低（P<0.05）,p-mTOR/mTOR均明显更高（P<0.05）。结论 电针三阴交穴可有效缓解PDM模型大鼠疼痛症状和子宫组织损伤，这可能与调控AMPK/mTOR信号通路、抑制氧化应激反应有关。

关键词

原发性痛经 / 电针 / 三阴交穴(SP6) / AMPK/mTOR信号通路 / 氧化应激