基于“脑-肠-菌”轴探讨子午流注揿针改善慢传输型便秘大鼠肠道功能的作用机制

摘要

目的 基于“脑-肠-菌”轴理论探讨子午流注揿针对慢传输型便秘（STC）大鼠肠道传输功能的作用机制。方法 选择SPF级Wister大鼠40只，雌雄各半，采用随机数字表法随机分为空白组8只和造模组32只。造模组每日灌胃3 mg/kg盐酸洛哌丁胺混悬液建立STC大鼠模型，连续给药14 d以抑制肠道蠕动；空白组给予等体积生理盐水灌胃。将造模成功后的大鼠随机分为模型组、西药组、普通揿针组和子午流注揿针组，每组8只。除空白组外，其余4组在干预期间继续按造模剂量给予盐酸洛哌丁胺，以维持STC模型稳定，空白组同期灌胃等体积生理盐水。西药组给予琥珀酸普芦卡必利0.18 mg/（kg·d）灌胃，每次1 mL/100 g，每日1次；普通揿针组于每日10:00取双侧天枢穴、大肠俞穴进行揿针干预；子午流注揿针组取穴方法和操作方法与普通揿针组一致，但干预时间是每日辰时（8:00）进行天枢穴干预，申时（16:00）进行大肠俞穴干预。连续干预14 d后，采用6 h内粪便粒数、6 h内粪便含水率、小肠推进率评估大鼠肠道动力；采用ELISA检测结肠组织5-HT、VIP及脑组织中NE蛋白相对表达水平；采用Griess化学法检测脑组织中NO浓度；采用16S rRNA测序分析5组粪便样品的肠道菌群变化；采用京都基因与基因组百科全书（KEGG）分析子午流注揿针组肠道菌群功能基因的富集情况。结果 (1)肠道动力：与空白组比较，模型组6 h内粪便粒数更少（P<0.05），粪便含水率更低（P<0.05），小肠推进率更低（P<0.05）；与模型组比较，西药组、普通揿针组及子午流注揿针组大鼠6 h内粪便粒数更多（P<0.05），粪便含水率更高（P<0.05），小肠推进率更高（P<0.05）；与普通揿针组比较，西药组和子午流注揿针组6 h内粪便粒数更多（P<0.05），小肠推进率更高（P<0.05）。(2)脑肠肽水平：与空白组比较，模型组结肠组织5-HT、VIP蛋白相对表达水平更低（P<0.05），脑组织NE蛋白相对表达水平更高（P<0.05）,NO浓度更高（P<0.05）；与模型组比较，西药组、普通揿针组及子午流注揿针组结肠组织5-HT、VIP蛋白相对表达水平更高（P<0.05），脑组织NE蛋白相对表达水平更低（P<0.05）,NO浓度更低（P<0.05）；与普通揿针组比较，西药组和子午流注揿针组大鼠结肠组织5-HT、VIP蛋白相对表达水平更高（P<0.05），脑组织NO浓度更低（P<0.05），子午流注揿针组脑组织NE蛋白相对表达水平更低（P<0.05）；与西药组比较，子午流注揿针组大鼠结肠组织5-HT、VIP蛋白相对表达水平更高（P<0.05），脑组织NE蛋白相对表达水平更低（P<0.05）,NO浓度更低（P<0.05）。(3)肠道菌群分析：在OTU水平上，空白组、模型组、西药组、普通揿针组、子午流注揿针组独有OTU数量分别为2 738、3 862、4 397、3 956、2 901,5组共有核心OTU数量有323个。α多样性分析结果显示，与空白组比较，模型组肠道菌群物种丰度及多样性呈下降趋势（P<0.05）；与模型组比较，西药组、普通揿针组和子午流注揿针组肠道菌群物种丰度及多样性呈上升趋势（P<0.05），其中子午流注揿针组上升趋势最明显（P<0.05）。β多样性分析结果显示，模型组与子午流注揿针组的样本间距离最远。差异物种分析显示，模型组动丝菌属呈较高丰度特征，而子午流注揿针组克雷伯菌属呈相对较高丰度特征，且特异性富集普雷沃氏菌属、拟杆菌属H等菌属；子午流注揿针组肠道菌群功能通路主要集中于代谢相关类别，其中碳水化合物代谢通路相对丰度最高，其次为氨基酸代谢、辅因子和维生素代谢以及萜类和聚酮类化合物代谢通路。结论 子午流注揿针能促进STC大鼠的肠道传输功能恢复，其机制可能与调控“脑-肠-菌”轴以改善肠道动力、恢复脑肠肽动态平衡并优化菌群结构与代谢有关。

关键词

慢传输型便秘 / 脑-肠-菌轴 / 子午流注揿针 / 肠道菌群 / 脑肠肽