黄芪甲苷Ⅳ联合丹参酮ⅡA对缺血性脑卒中大鼠神经保护作用

摘要

目的 探讨黄芪甲苷Ⅳ(astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)和丹参酮ⅡA(tanshinone ⅡA,Ta-ⅡA)联合应用对缺血性脑卒中大鼠神经保护作用及机制。方法 建立大脑中动脉闭塞模型(线栓法),氧糖剥夺(oxyglycan deprivation, OGD)模拟体外缺氧缺糖情况。SD大鼠分为假手术组(Sham)、模型组(MCAO)和AS-Ⅳ+Ta-ⅡA(给药)组，每组20只。按照剂量给AS-Ⅳ和Ta-ⅡA后，评定3组大鼠神经功能、握杠时间、脑组织梗死及水肿情况；CCK-8实验筛选出最优联合给药浓度；酶联免疫吸附法检测炎性因子如肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)和白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)水平；实时定量PCR(quantitative real time PCR,qRT-PCR)检测大鼠脑组织核因子相关因子2(Nrf2)和血红素氧合酶1(heme oxygenase enzyme 1,HO-1)mRNA水平；免疫荧光法检测脑组织神经元(cleaved-caspase 3,CC3)表达。结果 模型组神经功能评分、脑梗死体积、脑水肿、丙二醛(malondialdehyde, MDA)和NO、TNF-α以及白细胞介素1β(IL-1β)、HO-1 mRNA、Nrf2 mRNA、CC3表达水平较假手术组明显增加(P<0.05);握力、IL-10、GSH和SOD水平明显降低(P<0.05)。与模型组相比，给药组神经功能评分、脑梗死体积、脑水肿、MDA和NO、TNF-α以及IL-1β、CC3表达水平降低(P<0.05);握力、IL-10、GSH及SOD、Nrf2 mRNA、HO-1mRNA水平明显增加(P<0.05)。CCK-8(cell counting kit-8,CCK-8)试剂盒结果显示最佳浓度为AS-Ⅳ 15μg/mL、Ta-ⅡA 25μg/mL。体外实验中，与对照组相比，OGD组CC3表达增加；与OGD组相比，给药组降低。结论 AS-Ⅳ联合Ta-ⅡA用药不仅能减轻缺血性脑卒中大鼠氧化应激和炎症反应，也能通过激活Nrf2/HO-1通路抑制神经元凋亡。

关键词

缺血性脑卒中 / Nrf2/HO-1信号通路 / 氧化应激 / 炎症 / 凋亡