安五脂素通过调控氧化应激减轻神经元损伤的作用与机制

摘要

目的 探讨安五脂素（macelignan, MLN）对过氧化氢（H₂O₂）诱导的大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤细胞（PC12）神经元细胞氧化应激损伤的保护作用机制。方法 PC12细胞氧化应激模型是用H₂O₂诱导产生。细胞分为Control组、H₂O₂组（150μmol/L）和H₂O₂+MLN组（10μmol/L）。细胞计数试剂盒-8（cell counting kit-8,CCK8）用于确定H₂O₂造模浓度和最佳给药浓度，并用于检测MLN毒性。丙二醛（malondialdehyde, MDA）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase, SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（glutathione peroxidase, GSH-Px）、过氧化氢酶（catalase, CAT）表达水平通过试剂盒检测。DCFH-DA试剂盒用于检测各组活性氧（reactive oxygen species, ROS）水平。线粒体膜电位试剂盒JC-1检测各组线粒体膜电位情况。免疫荧光用于检测凋亡因子Cleaved-capase3。Western Blot法用来完成各组Cleaved-capase3、B淋巴细胞瘤-2（B lymphoma-2,Bcl-2）和Bcl-2相关x蛋白（Bcl-2 related x protein, Bax）表达水平检测。结果 CCK8结果显示，H₂O₂诱导浓度为150μmol/L,MLN的最佳给药浓度是10μmol/L,并且该浓度对于细胞没有毒性作用。与Control组相比，H₂O₂组氧化应激因子MDA水平较Control组增加，SOD、GSH-Px、CAT水平下降。与H₂O₂组相比，MLN治疗组MDA水平有所下降，SOD、GSH-Px、CAT水平均有所上升。ROS试剂盒检测结果表明，H₂O₂组ROS在细胞内存在过量堆积的现象。而MLN治疗之后，细胞内ROS水平明显降低。JC-1结果显示H₂O₂组线粒体膜电位比Control低，MLN介入治疗后，线粒体膜电位有升高的趋势。免疫荧光结果显示，H₂O₂组Cleaved-capase3荧光强度明显大于MLN治疗组。Western Blot结果显示，H₂O₂处理组Cleaved-capase3、Bax蛋白水平增加，Bcl-2蛋白水平有所下降。MLN治疗之后，Cleaved-capase3、Bax蛋白水平降低，而Bcl-2蛋白水平增加，且均具有统计学差异性（P<0.05）。结论 MLN通过调节细胞氧化应激进而抑制凋亡，减轻H₂O₂诱导的PC12细胞神经元损伤。

关键词

安五脂素 / 神经元 / 氧化应激 / 凋亡