ICAM1影响三阴性乳腺癌耐药细胞功能研究

摘要

目的 探究细胞间黏附分子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM1)基因对三阴性乳腺癌多柔比星/紫杉醇化疗耐药过程中细胞功能改变的调控作用。方法 通过收集无术前新辅助化疗和行术前新辅助化疗的三阴性乳腺癌样本，免疫组织化学(immunohistochemistry, IHC)及蛋白质印迹法(Western Blot)检测验证ICAM1的表达、实时定量聚合酶链式反应(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)及Western Blot检测乳腺癌细胞中ICAM1的表达、通过联合使用多柔比星和紫杉醇处理三阴性乳腺癌细胞构建耐药株、构建人ICAM1敲减慢病毒感染耐药细胞、细胞计数试剂盒8(cell counting kit-8,CCK-8)和5-乙炔基-2′-脱氧尿苷(5-ethynyl-2′-deoxyuridine, Edu)检测细胞增殖、Transwell小室实验(transwell chamber assay, Transwell)检测细胞迁移和侵袭、Western Blot检测铁死亡相关蛋白谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、酰基辅酶A合成酶4(acyl-coa synthetase 4,ACSL4)、溶质载体家族7成员11(solute carrier family 7 member 11,SLC7A11),乳腺癌耐药蛋白(ATP-binding cassette subfamily G member 2,ABCG2)的表达以及EMT蛋白上皮型钙黏附蛋白(epithelial cadherin, E-cad)、神经型钙黏附蛋白(neural cadherin, N-cad)和波形蛋白(Vimentin)的表达、三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)试剂盒检测细胞中ATP水平、2′,7′-二氯二氢荧光素二乙酸酯(2′,7′-dichlorodihydrofluorescein diacetate, DCHF-DA)探针检测脂质过氧化水平。结果 构建的人ICAM1敲减慢病毒感染MDA-MB-231细胞耐药株与敏感株，发现ICAM1有促进细胞活力、增殖、迁移及侵袭，促进乳腺癌耐药蛋白表达、抑制细胞铁死亡，促进EMT进程等作用。结论 本研究揭示ICAM1改变耐药细胞的功能包括提高增殖能力，提高迁移及侵袭能力，促进EMT进程，抑制铁死亡，提高脂质过氧化水平，提高ATP水平。同时ICAM1通过促进乳腺癌耐药蛋白ABCG2的表达，可能导致化疗耐药的发生。

关键词

细胞间黏附分子1 / 三阴性乳腺癌 / 化疗耐药 / 铁死亡通路 / 细胞功能