血府逐瘀胶囊治疗APAP诱导的药物性肝损伤的机制研究

摘要

目的 基于网络药理学、分子对接和动物实验探究血府逐瘀胶囊治疗对乙酰氨基酚(acetaminophen, APAP)诱导的药物性肝损伤的作用机制。方法 通过中药系统药理学数据库与分析平台(traditional Chinese medicine systems pharmacology database and analysis platform, TCMSP)和本草组鉴数据库(herbal medicine database, HERB)筛选血府逐瘀胶囊活性成分，经过SwissADME、Swiss Target Prediction数据库筛选和预测其对应靶点。通过人类基因数据库(GeneCards)、孟德尔遗传在线数据库(online mendelian inheritance in man, OMIM)、疾病基因网络(database of gene-disease associations, DisGeNET)获取药物性肝损伤的相关靶点。将药物与疾病的交集靶点导入STRING数据库构建蛋白质—蛋白质相互作用(protein-protein interaction, PPI)网络模型，在Cytoscape3.9.1中进行拓扑学参数分析。借助基因功能注释与整合发现数据库(database for annotation, visualization and integrated discovery, DAVID)对交集靶点进行基因本体论(gene ontology, GO)分析和京都基因与基因组百科全书(kyoto encyclopedia of genes and genomes, KEGG)富集分析，采用CB-Dock2在线分子对接服务器进行分子对接验证。动物实验验证网络药理学预测结果，采用APAP构建药物性肝损伤小鼠模型，分别给予不同剂量的血府逐瘀胶囊进行干预。苏木素—伊红(hematoxylin-eosin, HE)染色观察肝组织病理学变化，采用微板法测定血清生化指标谷丙转氨酶(alanine aminotransferase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)、碱性磷酸酶(alkaline phosphatase, ALP)、总胆红素(total bilirubin, TBIL),酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)法检测肝组织氧化因子超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、谷胱甘肽(glutathione, GSH)、过氧化氢酶(catalase, CAT)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)和炎症因子肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)、白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6),利用蛋白质印迹(Western Blot)法检测磷脂酰肌醇3-激酶-蛋白激酶B(phosphatidylinositol 3-kinase-protein kinase B,PI3K-AKT)和丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase, MAPK)通路关键蛋白的表达。结果 筛选出血府逐瘀胶囊活性成分158个，潜在靶点914个，药物性肝损伤疾病靶点1657个，交集靶点348个，PPI网络分析筛选出核心靶点67个，包括蛋白激酶B1(AKT1)、白细胞介素6(IL6)、肿瘤坏死因子(TNF)、肿瘤蛋白p53(TP53)、白细胞介素1β(IL1β)、表皮生长因子受体(EGFR)、信号转导与转录激活因子3(STAT3)、胱天蛋白酶3(CASP3)、B淋巴细胞瘤-2(BCL2)、原癌酪氨酸蛋白激酶(SRC)等。KEGG富集分析表明，血府逐瘀胶囊的作用主要是通过多种生物通路来实现的，包括癌症相关通路、代谢通路、PI3K-AKT信号通路和MAPK信号通路等。分子对接结果表明，血府逐瘀胶囊中主要活性成分槲皮素、山奈酚、黄芩素、β-谷甾醇、豆甾醇、异鼠李素、柚皮素、木犀草素与靶点AKT1、IL6、TNF、TP53、IL1β、EGFR结合良好。动物实验表明，血府逐瘀胶囊降低血清ALT、AST、ALP、TBIL及肝组织炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6水平，升高肝组织氧化因子SOD、CAT、GSH水平，降低MDA水平。Western Blot结果显示，血府逐瘀胶囊降低PI3K-AKT和MAPK信号通路中磷酸化磷脂酰肌醇3-激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)、磷酸化c-Jun氨基末端激酶(p-JNK)、磷酸化细胞外信号调节激酶(p-ERK)、磷酸化p38丝裂原活化蛋白激酶(p-P38)蛋白表达水平。结论 本研究通过网络药理学、分子对接与动物实验相结合的方法证实血府逐瘀胶囊通过多组分、多靶点、多通路发挥抗对乙酰氨基酚诱导的肝损伤的作用，其机制可能为抑制PI3K-AKT和MAPK信号通路相关蛋白表达来调节对乙酰氨基酚刺激引起的氧化应激、炎症反应。

关键词

血府逐瘀胶囊 / 对乙酰氨基酚 / 网络药理学 / 药物性肝损伤 / 信号通路