PRMT7通过调控Wnt/β-catenin信号通路对膀胱癌细胞侵袭性生物学行为、上皮间质转化的影响

摘要

目的 探讨蛋白质精氨酸甲基转移酶7(protein arginine methyltransferases 7,PRMT7)通过调控Wnt/β-catenin信号通路对膀胱癌细胞侵袭性生物学行为、上皮间质转化(epithelial-mesenchymal transition, EMT)的影响。方法 选取人膀胱癌细胞系5637、T24及人正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞，采用实时荧光定量聚合酶链反应(Real-Time quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western Blotting)检测PRMT7在不同细胞中的表达水平。将T24细胞分为空白对照组、阴性对照组(转染空载体)、PRMT7过表达组(转染PRMT7过表达质粒)、PRMT7干扰组(转染PRMT7 siRNA)、PRMT7+Wnt激活剂氯化锂(lithium chloride, LiCl)组(转染PRMT7 siRNA后加入LiCl处理)、空白对照组+LiCl、阴性对照组+LiCl,采用CCK-8法检测细胞增殖活性，Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力，Western Blotting检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白(β-catenin、GSK-3β、c-Myc)及EMT标志物(E-cadherin、N-cadherin、Vimentin)的表达水平。结果 PRMT7在5637、T24癌细胞中的mRNA和蛋白表达水平均高于正常膀胱上皮SV-HUC-1细胞，且T24细胞中PRMT7表达水平更高(P<0.05)。转染后48 h, PRMT7过表达组mRNA和蛋白表达水平高于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);PRMT7干扰组mRNA和蛋白表达水平低于空白对照组和阴性对照组(P<0.05);阴性对照组与空白对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。与空白对照组和阴性对照组相比，PRMT7过表达组T24细胞增殖活性增强，迁移细胞数和侵袭细胞数增多，β-catenin、c-Myc、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平升高，GSK-3β、E-cadherin蛋白表达水平降低(均P<0.05);PRMT7干扰组则呈现相反趋势(P<0.05)。空白对照组+LiCl、阴性对照组+LiCl与空白对照组、阴性对照组相比，细胞增殖、迁移、侵袭能力及相关蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05);PRMT7+Wnt激活剂LiCl组较PRMT7干扰组，细胞增殖活性增强，迁移和侵袭能力提升，β-catenin、c-Myc、N-cadherin、Vimentin蛋白表达水平升高，GSK-3β、E-cadherin蛋白表达水平降低(均P<0.05)。结论 PRMT7在膀胱癌中高表达，其可通过激活Wnt/β-catenin信号通路促进膀胱癌细胞增殖、迁移、侵袭及EMT过程，PRMT7有望成为膀胱癌治疗的潜在靶点。

关键词

膀胱癌 / 膀胱癌组织 / 上皮间质转化 / 肿瘤转移