雷公藤红素通过抑制NF-κB p65磷酸化及iNOS/COX-2表达减轻LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症

摘要

目的 探讨雷公藤红素(celastrol)对脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)诱导的小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)炎症反应的保护作用，并基于核因子-κB(nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells, NF-κB)信号通路及其下游关键酶环氧合酶2(cyclooxygenase-2,COX-2)和一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS)探讨其潜在分子机制。方法 体外培养RAW264.7巨噬细胞，依处理条件分为3组：对照组(Control组，含匹配终浓度DMSO)、LPS模型组(LPS组，1μg/mL LPS处理)及雷公藤红素干预组(LPS+Celastrol组，1μM雷公藤红素预处理1 h后加入LPS)。培养24 h后，采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(quantitative reverse transcription polymerase chain reaction, RT-qPCR)法检测细胞中促炎细胞因子白细胞介素-1β(interleukin 1β,IL-1β)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor alpha, TNF-α)及白细胞介素-6(interleukin 6,IL-6)的mRNA表达水平。采用蛋白质印迹法(Western Blotting)检测细胞内NF-κB p65、p-p65(Ser536)和下游炎症关键酶iNOS和COX-2的蛋白表达情况。结果 与对照组相比，LPS模型组细胞中IL-1β(升高16.8倍)、TNF-α(升高17.7倍)、IL-6(升高11.6倍)的mRNA表达水平显著升高(P<0.001),同时细胞内p-p65(Ser536)(升高7.2倍)、COX-2(升高18.5倍)及iNOS(升高4.1倍)蛋白表达量显著上调(P<0.001),p-p65(Ser536)/p65比值(升高6.9倍)亦显著上调(P<0.001),表明LPS成功诱导了细胞的炎症反应及NF-κB通路的活化。与模型组相比，1μM雷公藤红素预处理显著抑制了上述三种促炎细胞因子的mRNA转录(IL-1β、TNF-α、IL-6分别降低2.1倍、1.8倍、1.5倍，P<0.01),并显著下调了p-p65(Ser536)(降低1.9倍)、iNOS(降低1.8倍)及COX-2(降低1.3倍)的蛋白表达水平(P<0.01),p-p65(Ser536)/p65比值(降低1.53倍)亦显著下调(P<0.01)。结论 雷公藤红素能够有效抑制LPS诱导的RAW264.7巨噬细胞炎症反应，其机制可能通过抑制NF-κB p65的磷酸化活化，进而下调下游炎症关键酶iNOS和COX-2的表达，从而减轻炎症反应。

关键词

雷公藤红素 / 脂多糖 / 炎症 / NF-κB p65 / RAW264.7巨噬细胞