基于磁性层状双氢氧化物和核酸外切酶Ⅰ的新型大肠杆菌荧光传感器构建

摘要

目的 基于磁性层状双氢氧化物（magnetic layered double hydroxide,MLDH）对修饰在单链和双链DNA上的羧基荧光素（6-carboxyfluorescein,FAM）的高效淬灭，以及核酸外切酶Ⅰ（exonucleaseⅠ，ExoⅠ）对单链DNA的选择性降解作用，建立测定大肠杆菌的荧光传感器。方法 将不同浓度的大肠杆菌特征DNA与FAM标记的互补DNA探针杂交，形成FAM-双链DNA，加入Exo I选择性降解剩余探针，再加入MLDH吸附并淬灭FAM-双链DNA。通过磁铁分离上清液与MLDH，测量上清液的荧光强度。结果 在最优实验条件下，本法检测大肠杆菌特征DNA的线性范围为0.05～30 nmol/L，相关系数（R2）为0.997，检测限（3σ）为0.025 nmol/L，对江水、自来水和茶饮料中大肠杆菌DNA的回收率为85.4%～118%，相对标准偏差小于5%。结论 利用MLDH的荧光淬灭能力和Exo I对单链DNA的选择性水解能力成功构建了测定大肠杆菌的新型荧光传感器，与传统大肠杆菌检测法相比，所建新型传感器灵敏度高、选择性好、准确度高，能实现对大肠杆菌的快速检测。

关键词

磁性层状双氢氧化物 / 核酸外切酶Ⅰ / 荧光传感器 / 大肠杆菌 / DNA检测