聚左旋乳酸注射对皮肤免疫细胞及成纤维细胞谱系的影响

摘要

目的 评估聚左旋乳酸（poly-L-lactic acid,PLLA）注射对老年小鼠皮肤中T细胞与成纤维细胞谱系的影响。方法 选用雌性14月龄C57BL/6J老年小鼠，采用自身左右对照设计，在同一动物背部对称部位分别皮下注射聚左旋乳酸（poly-L-lactic acid,PLLA）或等体积生理盐水。每隔2周注射1次，共3次，于末次注射后第1周采集两侧皮肤行单细胞RNA测序分析免疫细胞及成纤维细胞亚群构成，并于末次注射后第1、2、4、8周分别取材行流式细胞术检测Th17细胞、γδT细胞和Treg细胞比例。统计学分析采用配对t检验或相应非参数检验，P<0.05为差异有统计学意义。结果 单细胞测序结果显示PL-LA侧Th17细胞为代表的Type-17免疫细胞数量相比生理盐水侧减少，CD4 Th17亚群差异及KEGG分析提示Th17细胞分化相关、T细胞受体、MAPK及Toll样受体相关信号通路下调。流式细胞术检测的结果与单细胞测序结果一致，显示PLLA侧Th17细胞比例下降、Treg比例升高，Th17/Treg比值显著低于生理盐水侧，在术后第2～4周Th17/Treg的比值达到最低（P<0.05），术后第8周Th17/Treg比值比值较术后第2～4周略有升高，但仍低于生理盐水侧。单细胞测序结果显示PLLA侧成纤维细胞中更多的是位于真皮乳头层参与合成ECM的Fb1亚型，而参与炎症趋化的Fb3亚型和参与纤维化的Fb4亚型显著减少。结论 PLLA注射在老年小鼠皮肤中可以抑制Th17/γδT为主的Type-17免疫反应以及其对应的炎性衰老，并重塑成纤维细胞谱系，使其更偏向乳头层/重塑型亚群，从而有望缓解炎性衰老相关的慢性炎症微环境并促进真皮ECM的有序重建。

关键词

聚左旋乳酸 / 炎性衰老 / Th17细胞 / Treg细胞 / γδT细胞 / 成纤维细胞亚型

基金资助

北京市自然科学基金·昌平创新联合基金(L254048)