去甲基化酶JMJD6影响BRAF突变型黑色素瘤耐药性形成的机制研究

摘要

目的 探究去甲基化酶JMJD6影响BRAF突变型黑色素瘤耐药性形成的可能机制。方法 利用荷瘤小鼠腹腔给药的方式建立针对BRAF抑制剂(达拉非尼)和MEK抑制剂(曲美替尼)具有稳定耐药表型的BRAF突变型黑色素瘤体内模型，使用TCGA、Oncomine、OSskcm等数据库分析、Western blot和免疫组化研究JMJD6在黑色素瘤中的表达情况及预后价值，同时在下调其表达水平后通过TUNEL凋亡试剂盒与体内成瘤实验检测耐药表型在体内外的逆转情况，最后通过生物信息学分析、shRNA干扰、Western blot和免疫荧光实验验证转录因子E2F2是否为JMJD6潜在靶点。结果 在依次建立3代耐药体内模型后，成功获得具有稳定耐药表型的BRAF突变型黑色素瘤体内模型A375-R和SK-Mel-28-R,TCGA、Oncomine、OSskcm等数据库均显示JMJD6在黑色素瘤中的表达较正常健康者明显升高且具有更差的预后(P<0.05)。Western blot和免疫组化结果显示，JMJD6在耐药型BRAF突变型黑色素瘤中出现高表达；利用shRNA下调JMJD6表达水平后，A375-R和SK-Mel-28-R在药物压力下凋亡水平和成瘤能力显著降低(P<0.05),呈现体内外耐药表型逆转现象；通过GeneMANIA、GEPIA数据库分析发现JMJD6与E2F2存在表达相关性(P<0.05),同时Western blot和免疫荧光验证下调JMJD6可以抑制E2F2表达以及RNA聚合酶Ⅱ的结合，并在shRNA下调E2F2表达水平的基础上验证其位于JMJD6分子机制下游。结论 JMJD6通过调控E2F2表达进而影响BRAF突变型黑色素瘤对BRAF和MEK抑制剂耐药性的形成。

关键词

BRAF突变型黑色素瘤 / 耐药性 / Jumonji结构域蛋白6 / E2F家族转录因子2