大眼双锯鱼热休克蛋白1B基因克隆及其对运输胁迫的响应

摘要

对大眼双锯鱼（Amphiprion ephippium）热休克蛋白A家族1B(heat shock protein family a member 1B,HSPA1B)的分子特征及其在运输状态下的表达模式进行了探讨。以大眼双锯鱼为实验材料，取其肝脏组织样品，提取RNA逆转录后进行HSPA1B基因克隆，然后使用实时荧光定量PCR的方法检测HSPA1B基因在各个组织中的表达情况。同时构建在运输状态下的应激模型，通过实时荧光定量PCR技术分析不同组织中HSPA1B基因在不同运输阶段的表达变化。结果显示，HSPA1B基因ORF全长1 734 bp，编码577个氨基酸残基，预测其分子质量大小约为63.94×10～3 u，理论等电点pI为5.42。构建系统进化发育树显示，大眼双锯鱼HSPA1B蛋白与眼斑双锯鱼（Amphiprion ocellaris）HSPA1B聚为一支，相似度高达99.13%。HSPA1B基因广泛分布于大眼双锯鱼（A. ephippium）各组织中，相比于肠道组织，在肌肉中表达量最高，其次是脑组织和皮肤组织，其他所测组织中表达量较低。除肝脏外，大眼双锯鱼（A. ephippium）HSPA1B基因在运输胁迫前期（6 h）即出现显著响应，表达上调，在运输中期（12 h,24 h）达到峰值，运输后期表达量下调，并维持一定量的高表达。HSPA1B基因参与大眼双锯鱼免疫组织应激性免疫应答，由此可将HSPA1B基因作为大眼双锯鱼是否处于应激状态的重要指标。

关键词

大眼双锯鱼 / HSPA1B / 序列分析 / 运输胁迫 / 表达分析