槲皮素对N2a/APP细胞的神经保护作用机制

摘要

目的 探究槲皮素在稳定表达人瑞典淀粉样蛋白前体蛋白APP695的小鼠神经母细胞瘤N2a细胞中神经保护作用的机制。方法 采用稳转APP695瑞士突变的N2a细胞(N2a/APP)为研究对象，通过CCK-8法检测槲皮素对N2a/APP细胞活力的影响；选择不同浓度槲皮素处理N2a/APP细胞，并用蛋白质印迹法(Western blot)法检测槲皮素处理后N2a/APP细胞内β-淀粉样蛋白前体蛋白(APP)、25kDa突触关联蛋白SNAP25)、突触素(Synaptophysin, SYP)和突触后致密区蛋白95(PSD95)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)通路蛋白、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶B(AKT)通路蛋白、胱氨酸/谷氨酸逆向转运系统的轻链亚基(xCT)蛋白及NADPH氧化酶4(NOX4)蛋白的表达水平；使用流式细胞术检测槲皮素处理后细胞活性氧自由基(ROS)和线粒体膜电位变化，免疫荧光法检测槲皮素处理后N2a/APP细胞内脂质过氧化和DNA损伤程度。结果 槲皮素处理N2a/APP细胞后，APP表达显著降低，SNAP25和Synaptophysin表达明显升高，磷酸化ERK1/2水平显著降低，磷酸化AKT水平升高，NOX4表达降低，xCT表达明显升高，线粒体膜电位恢复，氧化应激、脂质过氧化和DNA氧化损伤程度降低，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 槲皮素对N2a/APP细胞的神经保护作用机制可能与ERK1/2和AKT通路减轻氧化应激、恢复受损突触和损伤线粒体的功能有关。

关键词

阿尔兹海默症 / 槲皮素 / 淀粉样前体蛋白 / 线粒体功能障碍 / 氧化应激