基于网络药理学的益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力大鼠的免疫治疗效果及机制

摘要

目的 基于网络药理学探讨益气解毒复方对实验性自身免疫性重症肌无力（MG）大鼠免疫治疗的效果及机制。方法 运用中医药分子机理生物信息学分析软件（BATMAN-TCM）筛选益气解毒复方相关靶点信息，利用在线人类孟德尔遗传（OMIM）数据库以及Genecards数据库查询MG疾病有关靶点的信息；通过注释、可视化和综合发现数据库（DAVID）、Metascape数据库对益气解毒复方治疗MG的潜在靶点进行蛋白-蛋白互作网络（PPI）分析、基因本体（GO）功能富集及京都基因组百科全书（KEGG）相关信号通路分析；制备鼠源性乙酰胆碱受体（AChR）Rα97-116肽段抗原乳剂并皮下注射至30只无特定病原体（SPF）级雌性Lewis大鼠的尾基部、后肢垫部及背部（第1次免疫注射）,分别于第30天和第45天时进行加强免疫（第2、3次免疫注射）,第3次免疫注射结束后1周判断实验性自身免疫性MG（EAMG）大鼠模型是否成功，造模成功后EAMG大鼠随机均分为模型组、0.945 g/（kg·d）益气解毒复方（低剂量）组、1.890 g/（kg·d）益气解毒复方（中剂量）组、3.780 g/（kg·d）益气解毒复方（高剂量）组及5.400 mg/（kg·d）醋酸泼尼松片剂组，另取6只SPF级雌性Lewis大鼠作为正常组，各药物组大鼠分别予对应药物、正常组和模型组大鼠分别予等体积纯净水，连续灌胃干预30 d,采用电子天平和Lennon评分检测各组大鼠灌胃干预前和干预第30天时的体质量和肌力，同时采用酶联免疫吸附试剂盒检测各组大鼠血清AChR抗体（AChR-Ab）、白细胞介素-1β（IL-1β）、白细胞介素-6（IL-6）及肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平，采用流式细胞术方法检测各组大鼠灌胃干预第30天时外周血中白细胞分化抗原4（CD4⁺）T细胞、白细胞分化抗原8（CD8⁺）T细胞的百分比及T淋巴细胞亚群CD4⁺/CD8⁺比率；灌胃干预30 d后处死各组大鼠，取骨骼肌组织，采用苏木精-伊红染色（HE）评估骨骼肌组织的形态学特征。结果 筛选到益气解毒复方治疗疾病相关基因168个，PPI分析预测IL-6、TNF、丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1（AKT1）、肿瘤蛋白（TP53）等可能是其治疗MG的重要靶点；GO功能富集结果表明，细胞组成（CC）、生物过程（BP）及分子功能（MF）涉及354个、4 365个及61个条目，KEGG富集分析搜集到有关作用通路257条；灌胃干预第30天，与模型组相比，低、中、高益气解毒复方剂量组及醋酸泼尼松组大鼠体质量增加（P<0.01）,Lennon评分降低（P<0.01）,血清AChR-Ab、IL-1β、IL-6及TNF-α水平降低（P<0.05）;EAMG大鼠血清中CD4⁺ T细胞分布及CD4⁺/CD8⁺比值减少（P<0.01）,CD8⁺T细胞分布增高（P<0.01）,骨骼肌组织改善，肌纤维恢复，细胞核排列更规则，炎性细胞减少，其中益气解毒复方高剂量组效果较为明显。结论 益气解毒复方可减轻EAMG大鼠炎症反应、减轻骨骼肌组织的损伤及促进免疫系统恢复，其机制与血清AChR-Ab水平降低及平衡CD4⁺、CD8⁺T细胞两者的比例有关。

关键词

大鼠 / 重症肌无力 / 益气解毒复方 / 网络药理学 / CD4⁺/CD8⁺比值 / 乙酰胆碱受体抗体