梅花鹿DLX5基因克隆及表达分析

摘要

为研究梅花鹿（Cervus nippon）DLX5基因的结构和功能，进一步探究其与梅花鹿茸角骨化机制间的关系，采用RT-PCR技术对梅花鹿DLX5基因进行克隆，获得包含全部编码区的c DNA序列，对该基因的氨基酸序列进行生物信息学分析并构建系统进化树，通过KEGG富集分析其信号通路，运用实时荧光定量RT-PCR检测该基因在鹿茸生长不同时期的表达情况。结果表明：梅花鹿DLX5基因编码区长为870 bp，共编码289个氨基酸。DLX5蛋白为可溶性的不稳定蛋白，有2个保守结构域，主要定位于细胞核。梅花鹿DLX5蛋白与许多不同物种来源的DLX5蛋白氨基酸序列有较高相似度，比较保守。DLX5蛋白二级结构中无规则卷曲占比最大（78.89%），其后依次是α-螺旋、延伸链，占比分别为16.96%和4.15%。DLX5基因主要的作用通路为TGFβ信号通路、MAPK信号通路和Wnt信号通路等。实时荧光定量RT-PCR结果表明，DLX5基因在鹿茸生长后期（三杈茸）表达量显著增高，这种上调表达暗示了其在鹿茸骨化过程中发挥重要作用，说明其可能是鹿茸骨化相关候选基因。

关键词

梅花鹿 / DLX5基因 / 基因克隆 / 生物信息学分析 / 实时荧光定量RT-PCR