小反刍兽疫LAMP反应结果可视化检测方法比较研究

索婧媛; 郑茜之; 王博; 刘学东

野生动物学报 ›› 2024, Vol. 45 ›› Issue (03) : 664 -669.

索婧媛, 郑茜之, 王博, 刘学东

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摘要

环介导等温扩增（loop-mediated isothermal amplification,LAMP）技术是一种可应用于各种病原体检测、基因分型等领域的等温扩增技术。该技术所需设备简单且易于操作，因此具有较大的发展潜力。根据目前已经存在的判定LAMP结果的可视化方法，以可能对野生小反刍动物造成威胁的小反刍兽疫病毒（Peste des petits ruminants virus,PPRV)cDNA为检测对象，选择合适的引物组，比较评估均可在日光或紫外光下区分阴阳性结果的SYBR Green I、SYBR Safe Stain和羟基萘酚蓝（hydroxy naphthol blue,HNB)3种指示剂方法的适用性与灵敏度。结果表明：3种方法的灵敏度都很高，均与琼脂糖凝胶电泳相当。其中，SYBR Green I结果区分度高、不受体系成分影响且无须额外设备，但成本较高；SYBR Safe Stain具有良好的结果区分度，成本相对较低，但需要额外的紫外照射设备；HNB成本最低，但颜色区分度较低，且易受多种因素影响。建议在选择LAMP指示剂时，综合考虑成本、使用便利性、结果准确性及实验条件，通过充分的体系优化和验证，确保LAMP检测的准确性和可靠性。研究结果突显了不同方法的特征和适用场景，为研究人员根据不同场所与条件选择高效、便捷的LAMP反应结果可视化方法提供参考。