马鹿鹿茸原代前软骨与软骨细胞电穿孔法转染研究

摘要

电穿孔转染（电转染）是一种高效、低毒、操作方便的细胞转染技术，但在鹿茸原代细胞中还没有应用的先例。为探索电转染过程中影响鹿茸原代细胞电转染效率和细胞存活率的关键参数，以293T细胞系为平行实验组，将pCMV-C-EGFP质粒电转入马鹿（Cervus elaphus）鹿茸前软骨和软骨原代细胞中。结果显示：（1）在方波条件下，鹿茸前软骨细胞电转染电压500～700 V，脉冲长度0.4～1.4 ms，脉冲次数优选1或2次；而软骨细胞电转染电压500 V，脉冲长度0.2～1.3 ms，脉冲次数1或2次，可以在上述参数基础上进行各原代细胞后续试验优化。（2）物种（鹿、人）、细胞类型（原代细胞、细胞系）以及细胞组织来源（软骨、肾）等要素对电转染效率和细胞存活率结果具有较大影响。（3）电转染效率和细胞存活率通常存在反比关系。（4）原代细胞电转染效率均低于细胞系。研究结果可为电转染技术在鹿茸再生机理研究中的应用提供基础数据。

关键词

电穿孔转染 / 鹿茸原代细胞 / 质粒 / 电转染效率 / 细胞存活率