树突状细胞膜微泡在T细胞激活与结直肠癌细胞杀伤中的作用研究

摘要

目的：设计并评估一种基于树突状细胞膜微泡（dendritic cell membrane-derived microbubbles,DCM@MBs）的疫苗策略，探索其在肿瘤免疫治疗中的应用潜力，特别是通过激活T细胞实现肿瘤细胞的免疫特异性杀伤。方法：首先，通过肿瘤细胞膜蛋白提取和树突状细胞（dendritic cells,DCs）激活实验，确认肿瘤抗原可以有效刺激未成熟DCs的成熟。然后，利用成熟的树突状细胞膜和脂质混合制备DCM@MBs，并通过共聚焦显微镜（confocal laser scanning microscope,CLSM）和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE）等方法对其形态、大小及蛋白质组成进行表征分析。最后，通过体外共培养实验评估DCM@MBs对T细胞的激活作用，以及其在特异性杀伤肿瘤细胞中的能力。结果：在树突状细胞体外激活实验中，肿瘤细胞膜蛋白刺激后，25μg/mL组未成熟DCs表面主要组织相容性复合体Ⅱ类分子（major histocompatibility complex classⅡ，MHCⅡ）的表达水平为（25.167±1.203）%，与对照组相比明显升高（P<0.001）;DCM@MBs呈现出由红色细胞膜包裹形成的微泡，且分散均匀，大小约为1～5μm。在体外共培养实验中，DCM@MBs组T细胞INF-γ的分泌量为（120.574±5.179） pg/mL，与对照组相比明显促进了CD8+T细胞的激活（P<0.001）；且对CT26.WT肿瘤细胞的免疫特异性杀伤率为（30.737±0.216）%，是4T1小鼠乳腺癌细胞杀伤率（9.893±0.341）%的3.11倍。结论：DCM@MBs策略在肿瘤免疫治疗中展现了明显潜力，能够有效激活T细胞并特异性杀伤肿瘤细胞，为肿瘤免疫治疗提供了新思路。

关键词

树突状细胞 / 免疫疗法 / 微泡 / 细胞膜 / 树突状细胞疫苗