DExH-box解旋酶9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响

摘要

目的：研究DExH-box解旋酶9(DExH-boxhelicase9,DHX9)的氧连接-N-乙酰葡萄糖胺（O-linkedNacetylglucosamine,O-GlcNAc）修饰对乙型肝炎病毒（hepatitis B virus,HBV）相关肝癌细胞增殖能力的影响。方法：通过分子克隆构建pAdTrack-TO4-DHX9-3Flag重组腺病毒质粒，并将重组腺病毒质粒转染至HEK293细胞中，包装、扩增重组腺病毒AdDHX9。通过免疫共沉淀实验检测DHX9与O-GlcNAc转移酶（O-GlcNAc transferase,OGT）的相互作用，免疫荧光实验研究DHX9与OGT共定位情况。通过琥珀酰化小麦胚芽凝集素（succinylated wheat germ agglutinin,sWGA）和糖基化免疫沉淀实验（immunoprecipitation,IP）检测DHX9 O-GlcNAc修饰水平。通过克隆形成实验和细胞生长曲线探索DHX9 O-GlcNAc修饰对HBV相关肝癌细胞增殖能力的影响。结果：成功获得了重组腺病毒AdDHX9，经Western blot鉴定了DHX9的表达。DHX9与OGT相互作用，2者共定位于细胞核。sWGA和糖基化IP实验证实了DHX9能够发生O-GlcNAc修饰，并且HBV感染促进了DHX9 O-GlcNAc修饰水平。克隆形成实验显示，与AdGFP对照组（142.667±7.572）相比，AdDHX9组（386.667±15.630）的细胞克隆数量增加（P<0.001）。细胞生长曲线结果显示，AdDHX9组（22.860±0.770）比AdGFP对照组（13.670±0.517）的细胞整体生长速率增加（P<0.001）。结论：HBV感染促进DHX9 O-GlcNAc修饰；DHX9 O-GlcNAc修饰增强HBV相关肝癌细胞的增殖能力。

关键词

DExH-box解旋酶9 / 氧连接-N-乙酰葡萄糖胺 / 肝细胞癌 / 细胞增殖