柠檬苦素调节RIP1/RIP3/MLKL信号通路对心肌梗死大鼠心肌细胞坏死性凋亡的影响

摘要

目的：探究柠檬苦素（limonin,LIM）调节受体相互作用蛋白激酶-1(receptor-interacting protein 1,RIP1)/受体相互作用蛋白激酶-3(receptor-interacting protein 3,RIP3)/混合谱系激酶结构域样蛋白（mixed-lineage kinase domain-like protein,MLKL）信号通路对心肌梗死（myocardial infarction,MI）大鼠心肌细胞坏死性凋亡的影响。方法：将60只SD大鼠采用随机数字表法分为5组（每组n=12）：假手术组（Sham组）、MI模型组（Model组）、低剂量LIM组（LIM-L组，25 mg/kg LIM）、高剂量LIM组（LIM-H组，50 mg/kg LIM）和LIM高剂量+Nec-1组（LIM-H+Nec-1组，50 mg/kg LIM+0.6 mg/kg Nec-1）。通过结扎大鼠心脏冠脉的方式构建大鼠MI模型。测定大鼠心功能变化。伊红-苏木精染色（hematoxylin-eosin staining,HE）观察大鼠心肌组织病理学变化。2,3,5-三苯基氯化四氮唑（2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC）-伊文斯蓝（evans blue,EB）法检测大鼠心肌梗死面积。末端标记法（terminal-deoxynucleoitidyl transferase mediated nick end labeling,TUNEL）检测大鼠心肌细胞坏死性凋亡情况。实时荧光定量PCR(real time fluorescence quantitative PCR,RT-qPCR)、Western blot实验检测大鼠心肌组织RIP1/RIP3/MLKL信号通路相关mRNA与蛋白的表达及凋亡相关蛋白表达。结果：Model组大鼠较Sham组左室射血分数（left ventricular ejection fraction,LVEF）、左室收缩压（left ventricular systolic pressure,LVSP）、心肌组织B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达降低（P均<0.001），左室收缩末期容积（left ventricular end-systolic volume,LVESV）、左室舒张末压（left ventricular end-diastolic pressure,LVEDP）、左室舒张末期容积（left ventricular end-diastolic volume,LVEDV）、心肌梗死面积、细胞凋亡率、心肌组织RIP1、RIP3、MLKL mRNA和蛋白水平、Bcl-2相关X蛋白（Bcl-2 associated X protein,Bax）、胱天蛋白酶3(cysteinyl aspartatespecific proteinase 3,Caspase3)蛋白表达均明显升高（均P<0.001）,HE病理切片显示大鼠心肌细胞肿大、排列紊乱，出现坏死和大量炎性细胞浸润。与Model组相比，LIM-H组大鼠相应指标变化与上述相反（RIP1 mRNA:P=0.002,RIP3 mRNA:P=0.008，其余指标P均<0.001），大鼠心肌组织病理学损伤和炎性细胞浸润减轻。Nec-1促进了LIM对MI大鼠心肌细胞坏死性凋亡的减轻作用。结论：LIM可能通过下调RIP1/RIP3/MLKL信号通路减轻MI大鼠心肌细胞坏死性凋亡。

关键词

柠檬苦素 / 受体相互作用蛋白激酶-1/受体相互作用蛋白激酶-3/混合谱系激酶结构域样蛋白信号通路 / 心肌梗死 / 坏死性凋亡