陕西地区成年人凝血因子活性参考区间研究

Reference interval of coagulation factor activity among adults in Shaanxi，China

摘要

目的 探讨陕西地区成年人凝血因子活性水平，重建西门子凝血因子活性检测试剂盒的成年人参考区间。 方法 选取 2023年1月至2024年9月于空军军医大学第一附属医院进行凝血因子活性检测的体检或就诊的人员，根据纳入标准，本研究最终纳入391例18~60岁健康成年受试者，年龄分段标准分为3组，青年组（18~28岁，n=312）、中青年组（29~38岁，n=64）和中老年组（39~60岁，n=15），均使用Sysmex C5100凝血分析仪及配套西门子凝血因子检测试剂检测凝血因子Ⅱ（Factor Ⅱ，FⅡ）、FⅤ（Factor Ⅴ）、FⅦ（Factor Ⅶ）、FⅧ（FactorⅧ）、FⅨ（Factor Ⅸ）、FⅩ（Factor Ⅹ）、FⅪ（Factor Ⅺ）和FⅫ（Factor Ⅻ）的活性，比较各组间凝血因子活性差异，采用非参数法构建各因子的参考区间并对新旧参考区间进行验证。 结果 FV因子活性在各年龄组间差异存在统计学意义（χ²=10.99，P<0.001），线性回归分析发现纳入人群的FⅡ活性随年龄减低（P=0.006），FⅤ（P=0.001）和FⅧ（P=0.008）活性随年龄增加。FⅨ（t=3.613，P<0.001）和FⅩ（t=4.892，P<0.001）活性在性别分组中的差异具有统计学意义。新建参考区间FⅡ（86%~152%）、FⅤ（78%~156%）、FⅦ（65%~155%）、FⅧ（77%~151%）、FⅨ（64%~117%）、FⅩ（69%~158%）、FⅪ（63%~122%）和FⅫ（44%~126%），通过2轮验证实验，原参考区间全部无法通过验证，新参考区间全部通过验证。 结论 凝血因子活性在不同年龄段有差异，且随年龄变化趋势不一致，西门子试剂盒的参考区间无法满足临床需要，本研究自建参考区间性能更具有优势。

Abstract

Objective To investigate the level of coagulation factor activity among adults in Shaanxi，China，and to reestablish the reference interval of coagulation factor activity for adults measured by Siemens coagulation factor assay kit. Methods The individuals who underwent physical examination or attended The First Affiliated Hospital of Air Force Medical University from January 2023 to September 2024 and underwent coagulation factor activity testing were selected，and according to the inclusion criteria，391 healthy adults，aged 18-60 years，were enrolled and divided into 18-28 years group with 312 adults，29-38 years group with 64 adults，and 39-60 years group with 15 adults. The Sysmex C5100 coagulation analyzer and the Siemens coagulation factor test reagent were used to measure the activity of Factor Ⅱ（FⅡ），Factor Ⅴ（FⅤ），Factor Ⅶ（FⅦ），Factor Ⅷ（FⅧ），Factor Ⅸ（FⅨ），Factor Ⅹ（FⅩ），Factor Ⅺ（FⅪ），and Factor Ⅻ（FⅫ），and the activity of these coagulation factors were compared between the groups. The nonparametric method was used to establish the reference intervals for each factor and verify the old and new reference intervals. Results There was a significant difference in the activity of FV between the different age groups（χ² =10.99，P<0.01）. Linear regression analysis showed that FII activity decreased with age in all included populations（P=0.006），and FV（P=0.001） and FⅧ（P=0.008） activity increased with age. There were significant differences in the activity of FⅨ（t=3.613，P<0.001） and FX（t=4.892，P<0.001） between different sex groups. New reference intervals were establish for FⅡ（86%-152%），FV（78%-156%），FⅦ（65%-155%），FⅧ（77%-151%），FⅨ（64%-117%），FⅩ（69%-158%），FⅪ（63%-122%），and FⅫ（44%-126%），and after two rounds of verification tests，the original reference intervals failed the test，while the new reference intervals passed the test. Conclusion The activity of coagulation factors varies across different age groups，with an inconsistent changing trend with age. The reference interval of Siemens kit cannot meet the clinical needs，and the reference intervals established in this study have more advantages.

Graphical abstract

关键词

凝血因子活性 / 陕西地区 / 西门子 / 参考区间 / 非参数法

Key words

coagulation factor activity / Shaanxi area / Siemens / reference interval / nonparametric method

凝血因子是维持血液正常功能的重要组成部分，其活性水平直接影响出血和血栓等并发症的发生风险^[1]。在临床上，评估凝血功能状态通常通过检测凝血因子的活性水平来实现，而凝血因子活性的参考区间作为衡量个体凝血功能异常程度的重要依据，对于临床医生精准诊断和干预具有重要意义^[2]。

然而，在实际应用中，由于不同人种，不同地区间的人种凝血因子活性可能存在较大的差异性，使得凝血因子活性的参考区间也出现了不一致性。如果不能结合本地区情况，这种不一致可能导致检测结果的可靠性下降，进而增加因参考区间异常而产生的异常报告率，从而影响临床诊疗决策的准确性。为了解决这一问题，本研究采用间接法重新测定使用西门子试剂在陕西地区成人凝血因子活性的参考区间，并通过与已发表文献中的数据进行对比验证，以期为该地区临床医生更准确地掌握成人凝血因子正常水平提供科学依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象

本研究选取2023年1月至2024年9月于空军军医大学附属第一医院接受凝血因子检测的受检者，纳入标准：①年龄18~60岁；②体检结果正常。排除标准：①妊娠或哺乳期女性；②出血/血栓病史；③检测前2周服用华法林、利伐沙班、达比加群或氯吡格雷等抗凝/抗血小板药物。研究对象涵盖妇科常规筛查、骨科关节脱位、口腔颌面矫形、美容整形及神经功能异常患者

1.2 仪器与试剂

日本Sysmex公司生产的CS5100全自动血凝分析仪及配套的西门子凝血因子活性检测试剂。

1.3 标本来源

用3.2%枸橼酸钠抗凝管采集就诊患者或健康体检者外周静脉血4 mL，3 000 r/min，离心15 min获得乏血小板血浆，即时上机检测，上机前进行正常水平的室内质控。

1.4 参考区间建立和验证

参考区间建立采用Kolmogorov~Smirnov检验数据的正态分布，使用Tukey法删除离群值，对于非正态分布数据，使用Box~Cox转换，参考区间采用95%的置信区间。

从2024年9月体检或美容矫形人群中抽出20个样本，如果20例参考个体中只有不超过2例（≤2例）的观察值超出原始参考区间，即通过验证，若有5例或超过5例（≥5例）超出参考限，则没有通过验证，若有3例或4例超过参考限，再选20个参考个体进行验证，循环验证只进行2轮^[3]。

1.5 统计学方法

本研究采用MedCalc 15.2统计软件（MedCalc Software，Ostend，Belgium）进行数据分析。线性回归分析年龄与因子活性之间的相关性，计量资料经Shapiro-Wilk检验确认正态性后，符合正态分布者以均数±标准差（$\bar{x} \pm s$）表示，组间比较采用独立样本t检验（方差齐性经Levene检验确认）；非正态分布资料以中位数（四分位距）[M_d （P₂₅，P₇₅）]表示，多组间比较采用Kruskal-Wallis H检验，必要时进行Dunn事后两两比较。计数资料以例数（百分比）[n（%）]表示，组间比较采用Pearson χ²检验或Fisher确切概率法（当理论频数<5时）。所有统计检验均为双侧检验，检验水准α=0.05

2 结果

2.1 一般资料

本研究通过纳排标准，获得有效数据391例，根据年龄 段进行分组，各组纳入人数，病历来源，因子活性水平等见表1，FⅤ因子活性在各组间有差异（P<0.001）。线性回归分析所有纳入人群因子活性与年龄的变化趋势，FⅡ活性随年龄减低（P=0.006），FⅤ（P=0.001）和FⅧ（P=0.008）活性随年龄增加 ，见图1。

2.2 不同性别对因子活性的影响

男性组和女性组的因子活性，男性组Ⅸ和Ⅹ因子活性高于女性组，差异具有统计学意义（P<0.001），见表2。

2.3 不同参考区间对比

采用95%作为参考区间的置信区间，获得的各项目分别在男性、女性和总体3组中的参考区间，各分组与说明书提供的参考区间存在差异，见表3。

2.4 参考区间验证

使用重新抽取的以择期整形美容患者20例为验证样本，分别对因子活性的新旧参考区间进行验证。第一轮验证，FⅧ、FⅨ、FⅩ的原参考区间没有能通过验证但进行二轮验证，FⅧ、FⅨ、FⅪ和FⅫ的新参考区间没有通过验证但进行二轮验证。重新抽取新的20个样本进行验证，原参考区间组无因子通过验证，新参考区间均通过验证，见表4。

3 讨论

参考区间的概念是Grasbeck R和Saris NE^[4]1969年首次提出的。目前，临床上使用的各项目参考区间均来自文献、书刊或提供诊断产品公司的说明书，这也是当今各国的现状。但检验科在使用这样的参考区间报告患者的检测结果前，按照目前的管理要求必须对每个检测项目的参考区间给予验证或确认，证实该参考区间适用于医院的患者群体^[5]。研究者在使用本单位的凝血报告时，发现凝血因子活性异常值偏多，可能存在参考区间的偏移，因此想通过探讨成年人凝血因子活性的差异，同时验证现有参考区间并进一步制定更适宜的本地区参考区间。

目前国内凝血因子活性检测试剂来源主要依靠于思塔高、沃芬和西门子这3种进口试剂。凝血因子活性存在明显的地域以及人种差异，所以进口试剂参考区间的引用研究均以生产地所在区域为研究背景，当这些试剂引入中国后，应该进行相应的验证或修订以适合中国人群的需要^[6-7]。本研究在使用西门子试剂进行检测中发现，部分疑似正常人群凝血因子活性频繁出现超出参考区间情况，根据《WS/T 402—2024临床实验室检验项目参考区间的制定》中的要求验证了西门子凝血因子活性检测试剂盒所附参考区间的合理性，发现说明书参考区间并不适合中国西北人群^[3]。同时，对比了思塔高公司的参考区间发现，不同公司试剂的参考区间并不一致，且某些因子活性的参考区间具有较大差异^[6]。随后本课题组使用间接法重新建立中国西北人群西门子凝血因子活性试剂的参考区间^[3，8]。

本研究中发现FⅤ和FⅧ活性随年龄增高，这与沈隽霏等^[8]关于献血者血浆中凝血因子活性的研究中，这2个因子的活性随年龄增高的结果相似，但在该研究中FⅤ因子活性变化差异无统计学意义，但是本研究发现FⅤ随年龄增高差异有统计学意义，且FⅤ因子活性与之前的研究相比，活性差异加大。因为FⅤ因子为不稳定因子，且检测试剂、设备等均不一致，可能是造成结果差异的主要原因。

在不同性别人群因子活性对比中，FⅨ和FⅩ在男性群体中的活性更高。在孙振秀等^[9]研究中男性FⅨ活性虽然高于女性，但是差异无统计学意义。Henkens CM等^[10]测量了393个健康的献血者中的总蛋白S，蛋白C和FⅩ，以评估与性别，激素状态和年龄相关的差异，女性的所有测量蛋白质与男性相比均较低。而在Favaloro EJ等^[11]在2005年Blood杂志中发表的研究却表明在性别方面，FⅡ、FⅦ、FⅩ、FⅨ、FⅩ、FⅪ和FⅫ的女性水平较高（P<0.05）。对比纳入人群特征显示，受试者年龄明显高于本研究队列，且受试区域为澳大利亚。这也表明，不同地区、人种、年龄之间的因子活性存在较大差异，有必要针对不同区域对因子活性的正常人参考区间进行验证或自检。

新旧参考区间进行验证结果中西门子试剂说明书所附因子活性参考区间均无法通过验证，新建参考区间通过2次验证后全部通过。且新建参考区间FⅫ活性与西门子试剂说明书参考区间差异较大，与思塔高试剂的较为接近^[6]。Gordon EM等^[12]发现东方人群FⅫ滴度水平明显低于白种人，仅仅为白种人的一半左右。东方人种FⅫ活性为（0.23~0.68） U /mL，平均（0.46±0.15） U/mmL，白种人FⅫ活性为（0.78~1.70） U/mL，平均（1.00±0.24） U/mL。Han Y等^[13]研究发现，中国人群95%的受试者的FⅫ活性在47%~160.25%，没有证据表明有性别或年龄的影响。位于翻译起始密码子上游46位的已知C/T多态性的特定序列与FXII的活性相关。T等位基因纯合子，其等位基因频率为0.69，与C等位基因纯合子或C/T杂合子的受试者相比，其因子活性明显降低。

本研究探讨了以陕西为代表的西北人群凝血因子活性的表达趋势，并且结合临床实际应用中发现的缺陷，结合医院临床特点，使用非参数法重建了西门子试剂的参考区间，新的参考区间更有利于临床掌握凝血因子缺乏的程度，减少不必要的临床治疗。但参考区间的制定受限于未使用直接法，准确性有所欠缺，需要更多的实验数据进行累积验证。

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基金资助

吴阶平基金专项课题资助项目(320.6750.2024-23-10)