胸腺素β4在RAW264.7巨噬细胞炎症模型中的抗炎作用机制

摘要

目的 探讨胸腺素β4(Tβ4)对脂多糖（LPS）诱导的小鼠单核-巨噬细胞RAW264.7极化趋向，以及其对炎症反应的影响。方法 用LPS诱导RAW264.7细胞建立炎症模型。采用CCK-8法检测细胞活力，酶联免疫吸附法检测细胞因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)]的质量浓度；Griess法检测细胞培养上清液中一氧化氮（NO）的分泌情况；实时荧光定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测核因子-κB(NF-κB)、环氧酶-2(COX-2)、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平；蛋白免疫印迹法检测诱导型一氧化氮合酶（iNOS）、NF-κB、磷酸化NF-κB(p-NF-κB)、NF-κB抑制蛋白α(IκB-α)和磷酸化IκBα(p-IκB-α)蛋白水平；荧光染色双标法观察巨噬细胞的极化状态；免疫荧光染色检测NF-κB定位及表达。结果 1 000μg/L的胸腺素β4作用于RAW264.7细胞24 h后，细胞存活率为90.2%，与空白对照组比较差异有统计学意义（P <0.05）。各质量浓度的Tβ4均可有效抑制NO的产生（均P <0.000 1）。Tβ4降低LPS诱导的炎症模型RAW264.7细胞中促炎因子（TNF-α和IL-6）质量浓度及NO浓度，下调NF-κB、COX-2、TNF-α、IL-6 mRNA表达水平和iNOS、p-NF-κB和p-IκBα蛋白表达水平，抑制NF-κB的核转移，降低CD80的表达（均P <0.05）。结论 Tβ4具有抑制炎症反应的作用，其机制可能与抑制NF-κB信号通路和巨噬细胞M1极化有关。

关键词

胸腺素β4 / 脓毒症 / 巨噬细胞 / 感染 / 炎症 / NF-κB通路