阴阳攻积丸通过caspase3/GSDME通路诱导肝癌细胞焦亡的作用研究

摘要

目的 探讨阴阳攻积丸（YYGJ）诱导肝癌细胞焦亡的作用机制。方法 通过网络药理学分析YYGJ治疗肝癌的潜在靶点和机制，并将其主要活性成分与关键靶点胱天蛋白酶3(caspase3)进行分子对接。使用不同质量浓度的YYGJ处理人肝癌Huh7细胞，采用CCK8法检测细胞存活率，筛选最佳药物浓度。将Huh7细胞分为空白对照组、YYGJ低、中、高浓度组及阳性对照（奥沙利铂）组。使用划痕实验和Transwell实验分别检测YYGJ对Huh7细胞迁移、侵袭能力的影响。采用乳酸脱氢酶释放试验检测细胞毒性；ELISA法检测细胞上清液中白细胞介素（IL）-18、IL-1β的含量；Western blot法检测细胞中焦亡相关蛋白[caspase3、cleaved caspase3、消皮素E(GSDME)、GSDME-N端结构域（GSDME-N）]表达。结果 网络药理学筛选出排名前5的活性成分（小檗碱、橘皮素、四氢小檗碱、谷甾醇和槲皮素）与关键靶点caspase3，分子对接结果显示，YYGJ的主要活性成分与关键靶点caspase3具有较强的结合力。GO、KEGG富集分析发现YYGJ治疗肝癌与炎症、细胞焦亡密切相关。与空白组相比，YYGJ以浓度依赖性方式抑制Huh7细胞增殖、迁移和侵袭（均P<0.05），与空白组相比，YYGJ处理组乳酸脱氢酶释放量及IL-18、IL-1β水平上升，cleaved caspase3和GSDME-N蛋白表达也上调（均P<0.05）。结论 阴阳攻积丸可能通过caspase3/GSDME途径诱导肝癌细胞焦亡，从而抑制肝癌的恶性进展。

关键词

阴阳攻积丸 / 肝细胞癌 / 细胞焦亡 / 网络药理学 / 分子对接

基金资助

广东省自然科学基金面上项目(2022A1515011689,2023A1515011937); 国家中医药管理局中西医协同“旗舰”科室建设项目(2025TGL0370000014); 广东省中医药局资助项目(20251062)