基于PI3K/AKT信号通路探讨龙胆泻肝汤治疗糖尿病周围神经痛的作用机制

摘要

目的 探讨龙胆泻肝汤（LXT）治疗糖尿病周围神经痛（DPN）的作用机制。方法 通过网络药理学对LXT治疗DPN的通路靶点进行预测，并将其主要活性成分与关键靶点丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶1(AKT1)进行分子对接。使用高脂饮食联合腹腔注射链脲佐菌素（STZ）的方法对雌性C57BL小鼠进行DPN模型构建。将小鼠分为空白组、对照组、度洛西汀（duloxetine）组和LXT组。通过测定小鼠体质量、血糖以及动物行为学实验[包括热缩足潜伏期（TWL）测定和机械缩足阈值（MWT）测定]，检测LXT对DPN小鼠的治疗效果。在高糖微环境（HG）下，使用CCK8细胞活性检测对PI3K激动剂（740Y-P）、PI3K拮抗剂（LY294002）、AKT激动剂（SC79）、AKT拮抗剂（MK-2206）、PI3K拮抗剂加AKT激动剂联合（HG+LY+SC）、AKT激动剂加AKT拮抗剂联合（HG+SC+MK）干预后的细胞增殖活性进行分析。使用流式细胞术对上述干预方式下的细胞早期凋亡率与活细胞生存率进行分析。结果 网络药理学分析获得LXT有效活性成分70个，与DPN疾病交集靶点194个，筛选出5个核心活性成分、5个核心靶点，主要调控PI3K/AKT、AGE-RAGE等信号通路。分子对接显示，核心靶点AKT1与7-羟基-5-甲氧基-黄酮结合能达-6.42 kcal/mol，且与4种核心成分形成特征性氢键。动物实验验证DPN模型造模成功，LXT组与duloxetine组连续治疗14 d，小鼠的TWL和MWT均有改善（均P<0.001）。细胞实验表明，高糖组施旺细胞增殖活性为（62.766±1.922）%，较低糖组的（94.771±1.376）%低（P<0.05）；激动剂740Y-P、SC79干预后增殖活性回升至（67.016±1.284）%、（77.267±0.661）%（均P<0.05），拮抗剂LY294002、MK-2206则加剧抑制。析因分析发现SC79与LY294002(F=57.82,P<0.000 1)、MK-2206(F=36.53,P=0.000 3)存在交互作用。结论 LXT对实验性DPN有治疗作用，网络药理学预测的PI3K/AKT信号通路，经过细胞实验验证其对施旺细胞的凋亡有调控作用，并且两者有级联依赖关系，这可能是LXT治疗DPN的机制。

关键词

龙胆泻肝汤 / 糖尿病周围神经痛 / 网络药理学 / 消渴痹症 / 细胞凋亡