下调髓系白血病细胞系K562细胞中乳腺癌缺失因子1表达对其DNA损伤反应的作用初探

摘要

目的 探讨乳腺癌缺失因子1(DBC1)在慢性髓系白血病细胞系K562细胞DNA损伤反应(DNA damage response, DDR)中的作用。方法 采用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法(Western blot)检测DBC1在白血病及淋巴瘤细胞中的表达水平。通过RNA干扰(RNAi)技术构建稳定的DBC1基因沉默的K562细胞，分为干扰组(DBC1-sh1和DBC1-sh2组)和阴性对照组[无效慢病毒组(SCR组)]。通过依托泊苷(etoposide, vp16)诱导DNA损伤。溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)核酸掺入实验检测DBC1下调后K562细胞在DNA损伤前后细胞周期分布变化。克隆形成实验检测DBC1对K562细胞克隆形成能力的影响。流式细胞术检测DBC1下调后K562细胞在DNA损伤前后细胞凋亡的变化。蛋白质印迹法检测DNA损伤相关蛋白(γ-H2AX)和DNA损伤修复相关通路蛋白表达情况。单细胞凝胶电泳分析K562细胞DNA损伤程度。查询癌症基因组图谱(TCGA)肿瘤数据库，采用Kaplan-Meier生存分析研究DBC1表达与髓系白血病患者生存率的关系。结果 DBC1高表达的髓系白血病患者总体生存率显著低于低表达者(P<0.05)。在髓系白血病细胞系中DBC1蛋白质和mRNA的表达均显著高于其他白血病和淋巴瘤细胞系(P值均<0.05)。DBC1-sh1和DBC1-sh2组K562细胞中DBC1蛋白质相对表达量均显著低于SCR组(P值均<0.05)。vp16处理后，DBC1-sh1和DBC1-sh2组的S期细胞百分比均显著高于SCR组(P值均<0.05),克隆形成大小显著小于SCR组，数目显著少于SCR组(P值均<0.05)。DBC1-sh1组细胞的凋亡百分比高于SCR组(P<0.05)。vp16处理后，DBC1-sh1组细胞DNA损伤程度显著重于SCR组(P<0.05),非同源末端连接(non-homologous end joining, NHEJ)修复能力显著低于SCR组(P<0.05)。结论 DBC1是参与髓系白血病细胞系K562细胞DNA损伤应答反应的重要蛋白，具有调节K562细胞DNA损伤应答的作用。

关键词

乳腺癌缺失因子1 / DNA损伤反应 / 白血病,髓样