PTEN诱导激酶1在高血压小鼠主动脉硬化中的机制研究

摘要

目的 探讨PTEN诱导激酶1(PINK1)在高血压模型小鼠主动脉硬化中的作用及其对血管重塑的机制。方法取8～10周龄C57BL/6J雄性小鼠12只，随机分为阴性对照组和高血压造模组，每组6只，于皮下埋植微渗透泵缓慢释放血管紧张素(Ang)Ⅱ以诱导高血压小鼠模型。取8～10周龄野生型C57BL/6J雄性小鼠24只，随机分为空白对照组、假手术组、高血压模型组、PINK1处理组4组，每组6只。空白对照组，假手术组小鼠予0.9%氯化钠溶液(灌泵)+pLenti-NC(腹腔内注射),高血压模型组小鼠予AngⅡ(灌泵)+pLenti-NC (腹腔内注射),PINK1处理组小鼠予AngⅡ(灌泵)+pLenti-PINK1(腹腔内注射)。利用BP98A鼠尾套管无创血压仪监测血压变化，采用“点对点”法监测主动脉脉搏波传导速度(PWV),测定血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平，H-E染色观察主动脉组织结构，Western印迹法分析PINK1、CollagenⅠ、LC3B-Ⅱ、p62蛋白质相对表达量，免疫荧光染色观察CollagenⅠ表达。结果 构建小鼠模型的收缩压监测结果显示：灌注后第1～8天和第10、12、14天，高血压造模组小鼠的收缩压均显著高于阴性对照组(P值均<0.01);灌注第14天，阴性对照组小鼠PWV显著短于高血压造模组(P<0.05);Western印迹法检测结果显示，阴性对照组PINK1相对表达量显著高于高血压造模组(P<0.05);阴性对照组的CollagenⅠ相对表达量显著低于高血压造模组(P<0.01)。PINK1回补实验结果显示：灌注后第3～8天和灌注后第10、12、14天，PINK1处理组小鼠收缩压显著低于高血压模型组(P值均<0.01);PINK1处理组小鼠的PWV显著短于高血压模型组小鼠(P<0.01)。高血压模型组小鼠血清IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著高于假手术组(P值均<0.001),PINK1处理组IL-1β、IL-6和TNF-α水平均显著低于高血压模型组(P值均<0.01)。Western印迹法检测结果显示，与假手术组及空白对照组比较，高血压模型组中PINK1、LC3B-Ⅱ蛋白质相对表达量均显著降低(P值均<0.01),CollagenⅠ、p62蛋白质相对表达量均显著增高(P值均<0.01);PINK1处理组PINK1、LC3B-Ⅱ蛋白质相对表达量均显著高于高血压模型组(P值均<0.01),CollagenⅠ、p62蛋白质相对表达量均显著低于高血压模型组(P值均<0.01)。CollagenⅠ免疫荧光染色显示，CollagenⅠ呈束状，联结成网。与空白对照组相比，高血压模型组大鼠心肌中CollagenⅠ表达量均增高，经PINK1回补后CollagenⅠ表达量降低。结论 PINK1过表达后，可以减轻高血压模型小鼠中血管炎症，促进细胞自噬，抑制血管纤维化，为高血压引起的血管硬化防治提供了新的思路和方向。

关键词

高血压 / 自噬 / PTEN诱导激酶1 / 血管紧张素Ⅱ / 动脉 / 硬化