长链非编码RNA ZNRD1-AS1通过微RNA-194-5p调控HaCaT细胞增殖影响银屑病的发生及发展

摘要

目的 探讨长链非编码RNA(lncRNA)ZNRD1-AS1靶向调控微RNA(miR)-194-5p对HaCaT细胞增殖的影响和机制。方法 通过生物信息学预测分析及相关分子生物学手段，寻找miR-194的上游基因。利用脂质体转染法将ZNRD1-AS1siRNA、siRNA阴性对照（si-NC）转染到HaCaT细胞中，共设置为3组：si-NC+miR-194-5p组、si-ZNRD1-AS1+miR-194-5p组和si-ZNRD1-AS1+miR-194-5p抑制剂组。此外，构建野生型（WT）载体lncRNA ZNRD1-AS1-WT与突变型（MUT）载体lncRNA ZNRD1-AS1-MUT，分别与miR-194-5p模拟物及其阴性对照共转染至HaCaT细胞，分为ZNRD1-AS1-WT+miR-NC组、ZNRD1-AS1-MUT+miR-NC组、ZNRD1-AS1-WT+miR-194-5p模拟物组和ZNRD1-AS1-MUT+miR-194-5p模拟物组，检测各组荧光素酶活性。采用双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证ZNRD1-AS1和miR-194-5p的靶向调控关系。采用克隆形成实验和CCK-8细胞增殖试验检测敲减ZNRD1-AS1后对HaCaT细胞增殖的影响。结果 生物信息学预测分析显示，lncRNA ZNRD1-AS1是miR-194的上游基因。双荧光素酶报告结果显示，ZNRD1-AS1-WT+miR-194-5p模拟物组HaCaT细胞的荧光素酶活性显著低于ZNRD1-AS1-WT+miR-NC组（t=-5.40,P<0.05）。qRT-PCR检测结果显示，在ZNRD1-AS1siRNA作用下miR-194前体的表达差异均无统计学意义（P值均>0.05），而miR-194成熟体的表达水平升高（P<0.05）。克隆形成实验结果显示，si-ZNRD1-AS1+miR-194-5p组实验后细胞数显著少于si-NC+miR-194-5p组（t=6.78,P<0.05）。CCK-8法检测结果显示，在24h、48h、72h和96h时间点，si-ZNRD1-AS1+miR-194-5p组的吸光度（A）值均显著低于si-NC+miR-194-5p组（t=8.25、7.63、6.92、6.41,P值均<0.01）。EdU细胞增殖法检测结果显示，si-ZNRD1-AS1+miR-194-5p组细胞增殖比率显著低于si-NC+miR-194-5p组（t=6.17,P<0.05）。结论 lncRNA ZNRD1-AS1可能通过抑制miR-194，促进角质形成细胞增殖，从而促进银屑病的发生及发展。

关键词

ZNRD1-AS1 / miR-194-5p / 银屑病 / 角质形成细胞 / 增殖