碱性成纤维细胞生长因子联合复合细胞膜片注射治疗雌性大鼠压力性尿失禁的效果评价

摘要

目的 评价碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）联合复合细胞膜片注射治疗雌性大鼠压力性尿失禁（SUI）的效果。方法 体外实验：提取原代脂肪干细胞（ADSC），将其培养成细胞膜片并进行表征，获取大鼠心脏微血管内皮细胞，与ADSC膜片构建复合细胞膜片。采用Transwell实验评估血管内皮细胞的迁移能力，采用CCK-8实验评估ADSC、血管内皮细胞的增殖能力。动物实验：选取雌性Sprague Dawley（SD）大鼠24只（体重约为200g），分为对照组（未进行任何处理）、SUI组（仅采用阴部神经离断法进行造模）、ADSC膜片组（SUI造模的基础上注射ADSC膜片进行治疗）、复合细胞膜片+bFGF组（SUI造模的基础上注射搭载有大鼠心脏微血管内皮细胞的ADSC膜片联合bFGF注射治疗）共4组，每组各6只。完成注射4周后，对以上4组大鼠进行尿动力学检测，并对尿道取材，采用Masson染色及结蛋白（Desmin）、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、CD31免疫荧光染色评估建模和修复效果。结果 ADSC膜片和复合细胞膜片+bFGF均构建成功。Transwell实验结果显示，单纯ADSC、ADSC膜片、ADSC膜片+bFGF培养基中迁移细胞数量分别为（35±3）、（78±4）、（186±7）个/视野，ADSC膜片+bFGF培养基中迁移细胞数量显著多于ADSC膜片培养基和单纯ADSC培养基（P值均<0.05）,ADSC膜片培养基显著多于单纯ADSC培养基（P<0.05）。CCK-8实验结果显示，培养第3、5、7天，添加bFGF的培养基ADSC的A₄₅₀值分别为0.51±0.02、1.01±0.04、1.23±0.07，不添加bFGF的培养基分别为0.40±0.01、0.78±0.03、0.90±0.05，均显著高于培养第1天（基线）的0.20±0.01、0.20±0.02（P值均<0.05）；添加bFGF的培养基血管内皮细胞的A₄₅₀值分别为0.88±0.01、1.51±0.02、1.80±0.02，不添加bFGF的培养基分别为0.72±0.01、1.20±0.02、1.60±0.02，均显著高于培养第1天（基线）的0.41±0.01、0.40±0.02（P值均<0.05）；添加bFGF的培养基培养第3、5、7天ADSC和血管内皮细胞的A₄₅₀值均显著高于不添加bFGF的培养基同时间（P值均<0.05）。尿动力检测结果显示，SUI组的膀胱漏尿点压（LPP）和膀胱最大容量（MBC）均显著小于对照组（P值均<0.05），验证大鼠SUI模型建模成功。ADSC膜片组大鼠LLP和MBC均显著大于SUI组（P值均<0.05），复合细胞膜片+bFGF组大鼠LLP和MBC均显著大于ADSC膜片组和SUI组（P值均<0.05）。尿道组织学Masson染色显示，与SUI组相比，ADSC膜片组和复合细胞膜片+bFGF组的平滑肌和横纹肌肌层明显增厚，肌细胞数量增多；复合细胞膜片+bFGF组的平滑肌和横纹肌肌层较ADSC膜片组更厚，肌细胞数量更多。SUI组的尿道括约肌Desmin、α-SMA、CD31阳性细胞比例均显著低于对照组（P值均<0.05）,ADSC膜片组和复合细胞膜片+bFGF组Desmin、α-SMA、CD31阳性细胞比例均显著高于SUI组（P值均<0.05），复合细胞膜片+bFGF组Desmin、α-SMA、CD31阳性细胞比例均显著高于ADSC膜片组（P值均<0.05）。结论 bFGF联合复合细胞膜片注射可以有效治疗雌性大鼠的SUI，且在功能学和组织学方面的效果均优于ADSC膜片。

关键词

碱性成纤维细胞生长因子 / 细胞膜片 / 尿失禁,压力性 / 尿道括约肌