单囊泡分析技术在尿液来源细胞外囊泡中检测前列腺特异性膜抗原阳性亚群的可行性研究

摘要

目的 探讨基于纳米流式细胞术（nano-flow cytometry,nFCM）的单囊泡分析技术在尿液来源细胞外囊泡（urinederived extracellular vesicles,UEVs）中检测前列腺特异性膜抗原（prostate-specific membrane antigen,PSMA）阳性亚群的可行性，并初步分析UEVs中PSMA阳性率与前列腺癌国际泌尿病理学会（International Society of Urological Pathology,ISUP）分级之间的关系。方法 前瞻性纳入经穿刺病理活组织检查确诊为前列腺腺泡腺癌并拟行根治性前列腺切除术的患者16例。术前采集患者的清晨中段尿液，并依据术后病理ISUP分级，将患者最终分为ISUP 1～3级组（n=9）与ISUP4～5级组（n=7）进行分析。采用超速离心法分离UEVs，并通过透射电子显微镜和蛋白质免疫印迹对其形态学特征及标志蛋白表达进行鉴定。采用nFCM对单个细胞外囊泡（extracellular vesicle,EV）进行检测，并使用荧光标记抗PSMA抗体分析EV表面PSMA的表达情况，比较不同病理分组间PSMA阳性UEVs亚群比例的差异。结果 两组UEVs均呈典型囊泡形态，直径为50～150nm，并表达EV特异性标志蛋白。nFCM检测结果显示，ISUP 4～5级组UEVs中PSMA阳性率显著高于ISUP 1～3级组（P=0.000 3）。两组患者UEVs总颗粒浓度分布相近，ISUP 1～3级组与ISUP 4～5级组之间差异无统计学意义（P=0.680 6）。上述结果提示，UEVs中PSMA阳性亚群比例的升高并非由UEVs总体数量差异所致，可能是反映肿瘤相关分子特征在单囊泡水平的改变。结论基于nFCM的单囊泡分析技术在UEVs中检测PSMA阳性亚群具备良好的方法学可行性，有助于构建可重复、可推广的检测流程。该无创检测策略有望作为前列腺癌术前风险评估的辅助工具。

关键词

前列腺癌 / 细胞外囊泡 / 前列腺特异性膜抗原 / 单囊泡分析 / 纳米流式细胞术 / 预后分层