基于微纳米技术的免疫检测新方法

吴玉娟; 李姝亭; 翟荣云; 张玮莹; 郭向东; 贲亚琍

doi:10.13885/j.issn.0455-2059.2025.02.011

兰州大学学报（自然科学版） ›› 2025, Vol. 61 ›› Issue (2) : 231 -237+245. DOI: 10.13885/j.issn.0455-2059.2025.02.011

基于微纳米技术的免疫检测新方法

吴玉娟, 李姝亭, 翟荣云, 张玮莹, 郭向东, 贲亚琍

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摘要

通过构建一种基于微纳米技术的免疫检测新方法,对结直肠癌患者外周血中循环肿瘤DNA(ctDNA)的PIK3CA基因E542k甲基化的表达量进行高灵敏度、高特异性检测.制备线性阵列结构的微芯片,在其表面孵育功能化的肽核酸金纳米探针(PNA-AuNPs)复合物、ctDNA及5'-甲基胞嘧啶单克隆抗体-羧基化多壁碳纳米管复合物制备出ctDNA纳米生物传感器,采用电化学工作站检测并通过回收实验验证其对临床血浆中ctDNA浓度检测的可行性.结果表明,该生物传感器能够特异性检测PIK3CA基因E542k甲基化水平,检测范围为50～10～4 fmol/L,最低检测限为10 fmol/L,回收率为89.11%～102.64%;分别对正常人与结直肠癌患者血浆构建的传感器进行电化学检测,发现电流峰值具有显著性差异(P<0.01),通过线性方程可以计算出患者血浆中的PIK3CA基因E542k甲基化水平;采用共聚焦显微镜验证,发现正常人与结直肠癌患者构建的传感器中ctDNA荧光染色表达量具有明显不同,证明其可以用于临床血样检测ctDNA浓度.