重组球菌和球虫多表位抗原的表达及特性研究

摘要

本研究旨在设计针对牛链球菌和牛球虫的联合多表位疫苗.通过生物信息学筛选两种病原体的T/B细胞优势表位基因序列，串联拼接后引入霍乱毒素B亚单位（CTB）作为分子内佐剂，设计得到多表位重组抗原CARR(CTB-AMA1-RodA-RodA).经密码子优化后，将CARR基因克隆至pET28a（+）质粒，转化至大肠杆菌BL21(DE3)，成功构建了稳定的表达工程菌. SDS-PAGE显示工程菌可高效表达约90 kDa目标蛋白，Western blot验证表达蛋白能与抗CTB及抗牛链球菌抗体特异性结合，且20代内工程菌质粒保有率超80%.纯化后的CARR蛋白免疫蛋鸡，7 wk后ELISA检测显示特异性IgY抗体效价达1∶12 800.体外中和实验证实，该抗体显著抑制牛链球菌生长，说明其具备功能性中和活性.结果表明，CARR重组蛋白可有效快速激发宿主体液免疫应答，是牛链球菌和牛球虫联合疫苗的有效候选抗原靶点.

关键词

牛链球菌 / 牛艾美尔球虫 / 重组多表位抗原 / 表达特性 / 中和抗体