p53调控TGF-β1诱导的翼状胬肉成纤维细胞增殖、转分化的研究

摘要

本研究是为阐明p53是否介导mTOR在TGF-β1诱导的人翼状胬肉成纤维细胞（HPFs）增殖、转分化过程中发挥作用.从人原发性翼状胬肉组织分离培养HPFs，使用10 ng/mL TGF-β1预处理48 h诱导HPFs细胞活化后，分别采用慢病毒转染敲低p53和10μmol/L Nutlin-3激活p53，通过CCK-8检测细胞活力、划痕实验分析迁移能力、qPCR和Western blotting测定PCNA、α-SMA、p53及p-mTOR/mTOR的表达差异.结果显示，TGF-β1预处理活化HPFs后，细胞活力与迁移能力显著增强，PCNA、α-SMA的表达增加.在TGF-β1诱导的HPFs中使用慢病毒敲低p53后，相较于TGF-β1组，HPFs的细胞活力显著增强，细胞迁移能力也显著增强，PCNA,p-mTOR/mTOR的表达水平显著上调，而α-SMA的表达水平下调.在TGF-β1诱导的HPFs中使用Nutlin-3处理激活内源性p53后，相较于TGF-β1组，HPFs的细胞活力显著降低，细胞迁移能力也明显减弱，PCNA,p-mTOR/mTOR的表达水平显著下调，而α-SMA的表达水平明显上调.上述结果表明，p53通过调控mTOR在TGF-β1诱导的HPFs的增殖、转分化过程中的发挥着重要作用，且p53对增殖与转分化呈现差异化调控，这一差异化效应揭示了p53在纤维化微环境中的功能可塑性.

关键词

翼状胬肉成纤维细胞 / p53蛋白 / 哺乳动物雷帕霉素靶蛋白 / 增殖 / 转分化