鸭骨髓源树突状细胞的诱导培养及功能分析

摘要

旨在建立鸭骨髓源树突状细胞(DC)体外诱导培养方法，分析DC基本生物学功能。在无菌条件下分离鸭骨髓单核细胞，优化粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)工作浓度，在体外进行诱导培养，然后通过形态学观察、吞噬活性检测、表面标志物流式鉴定、分泌细胞因子和刺激淋巴细胞增殖能力的测定，对制备的DC进行形态和生物功能评价。结果：添加20 ng/mL的IL-4和40 ng/mL的GM-CSF可以诱导出高吞噬活性的DC,诱导培养后3 d可见菱形、有纤突的细胞；经脂多糖(LPS)刺激成熟的DC,呈现典型的树突状结构，细胞表面CD11c、CD80和MHCⅡ分子表达量分别为80.08%、81.27%和91.47%;DC培养体系中白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)分泌量随着培养时间延长而增加，并在成熟后分泌量显著升高(P<0.05);CCK-8法检测结果显示成熟后的DC以1∶5比例与淋巴细胞混合培养，能够显著刺激淋巴细胞增殖。本试验成功建立鸭骨髓源DC体外诱导培养方法，制备细胞具备了树突状细胞的基本生物学功能。

关键词

鸭 / 树突状细胞 / 体外培养 / 功能分析