基于P32蛋白的山羊痘病毒抗体荧光微球检测方法的建立

摘要

为建立一种山羊痘病毒(GTPV)抗体快速检测方法，试验将携带GTPV结构蛋白P32基因的重组质粒pET28a-P32转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中，经IPTG诱导后获得了重组蛋白，纯化后经Western blot鉴定表明该蛋白具有良好的特异性和反应原性。以荧光微球为标记材料对P32蛋白进行标记，通过优化反应条件制备了快速检测GTPV抗体的荧光微球免疫层析试纸条，并对其性能进行评价。结果：该试纸条与山羊副流感病毒3型(CPIV3)、小反刍兽疫病毒(PPRV)、羊口疮病毒(ORFV)的阳性血清均无交叉反应；阳性血清稀释至800倍仍能检出阳性，敏感性较高；批内变异系数小于10%,批间变异系数小于15%,稳定性较好；与ELISA检测方法对比的总符合率为92.5%。综上，本试验建立的荧光微球试纸条可用于GTPV抗体的快速检测和流行病学调查。

关键词

山羊痘病毒 / P32蛋白 / 荧光微球 / 抗体

基金资助

山东省羊产业技术体系岗位专家项目(SDAIT-10-07); 滨州市农社领域科技创新政策引导计划项目(2023SHFZ004)