狂犬病颗粒样疫苗的制备及免疫评价

摘要

为研发高免疫原性的新型狂犬病颗粒样疫苗，利用PCR方法扩增狂犬病病毒HEP-Flury株的G蛋白和M蛋白基因序列，将其依次克隆至Bac-to-Bac杆状病毒表达系统穿梭载体pFastBac dual上，构建重组质粒pFD-GM。制备基于pFD-GM的重组杆粒，转染至Sf9细胞，得到重组杆状病毒rb-GM,在Sf-9细胞中表达获得病毒样颗粒VLP-GM。经SDS-PAGE、Western blot和间接免疫荧光鉴定，重组杆状病毒成功表达了G蛋白(约56 kDa)和M蛋白(约23 kDa);经电镜观察，VLP-GM大小约为100 nm×50 nm,呈表面带有纤突的子弹形状，与典型的狂犬病病毒粒子类似。将VLP-GM免疫犬，经测定犬在二次免疫后产生较灭活疫苗更高的中和抗体水平，达到7.81 U/mL,并且与单独免疫G蛋白相比可刺激更多细胞因子如白细胞介素4(IL-4)和γ-干扰素(IFN-γ)生成。本研究成功表达了狂犬病病毒的病毒样颗粒VLP-GM,证明了其免疫原性，为后续的疫苗研制和抗体制备奠定了基础。

关键词

狂犬病病毒 / 病毒样颗粒 / Bac-to-Bac杆状病毒表达系统