非洲猪瘟病毒C129R蛋白与E165R蛋白的可溶性表达、胞外酶活力测定与结构预测分析

王彦伟; 岳亚男; 张素玲; 李欢欢; 陈赵媛; 刘月月; 逄文强; 田克恭

畜牧与兽医 ›› 2024, Vol. 56 ›› Issue (07) : 52 -57.

王彦伟, 岳亚男, 张素玲, 李欢欢, 陈赵媛, 刘月月, 逄文强, 田克恭

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摘要

C129R和E165R分别是非洲猪瘟病毒(ASFV)基因组编码的一种Mn依赖的超氧化物歧化酶和尿嘧啶脱氧核糖核苷三磷酸酶，2种酶均参与ASFV的复制过程。通过研究ASFV C129R蛋白与E165R蛋白的功能，以指导非洲猪瘟的诊断及免疫预防研究。对ASFV SY-18株的C129R和E165R基因序列进行密码子优化后，利用大肠杆菌进行表达，纯化后获得重组蛋白，通过Western blot鉴定其反应性，并对其胞外酶活力进行测定，对C129R蛋白的结构预测结果进行分析。结果：实现了C129R蛋白与E165R蛋白的可溶性表达，重组蛋白分子量分别约为15 kDa和18 kDa, Western blot显示C129R与E165R蛋白均能与ASFV阳性血清产生特异性反应；胞外酶活力测定显示，C129R与E165R蛋白在胞外均有酶学活性，比酶活力分别为(60.2±3.8) U/mg和(32.6±2.4) U/mg;蛋白质结构预测结果显示，C129R为双结构域蛋白，主要由N端α螺旋结构域和C末端α/β结构域组成，C129R蛋白N端α螺旋结构域和C末端α/β结构域的交界处可能是其主要活性位点，序列保守的β-折叠桶(K_(32)～A_(101))可能在其发挥功能时起重要作用。