H3N2亚型犬流感病毒HA1基因的优化表达与间接ELISA检测方法的建立

摘要

为开展H3N2亚型犬流感的血清流行病学调查，本研究拟原核表达犬流感病毒(CIV)血凝素1(HA1)基因，建立一种灵敏、准确、稳定的ELISA检测方法。对地方毒株的HA1基因进行氨基酸序列优化，采用化学合成法合成目的基因，插入pET30a中并转化至大肠杆菌表达，对蛋白进行纯化、鉴定，建立CIV间接ELISA方法。结果显示：优化后的HA1基因序列密码子对原核表达系统的CAI指数升至0.88,无复杂二级结构，蛋白可获得高效表达；原核表达后蛋白主要存在于包涵体中，经纯化、复性后的蛋白具备作为诊断抗原的应用价值；建立的间接ELISA方法检测国内采集的1 690份犬血清，显示H3N2亚型CIV整体阳性率为9.23%,与商品化试剂盒符合率为97.9%。提示：建立的间接ELISA方法可靠，具备良好的应用前景。

关键词

犬流感 / H3N2 / 血凝素1 / 原核表达 / 间接ELISA