干扰OPN基因对贵州黑山羊卵巢颗粒细胞增殖、凋亡及繁殖相关基因的影响

摘要

旨在探究骨桥蛋白(OPN)基因与贵州黑山羊卵巢颗粒细胞(OGCs)增殖和凋亡间的关系。以贵州黑山羊为研究对象，通过构建OPN基因的4个干扰载体，转染至OGCs,并采用实时荧光定量PCR技术检测不同干扰载体对OPN基因的抑制效率，筛选最佳干扰载体；采用细胞计数试剂盒-8(CCK8)检测细胞增殖活力，细胞划痕试验检测其迁移能力；实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测与其相关的繁殖标记基因和凋亡相关基因的表达情况。结果：成功构建了OPN基因的4个干扰载体，与shRNA-NC组相比，shRNA-OPN-222、shRNA-OPN-385和shRNA-OPN-741均极显著抑制了OPN基因的表达(P<0.01),且shRNA-OPN-222抑制效果最佳；CCK8和细胞划痕试验结果表明，与shRNA-NC组相比，shRNA-OPN-222极显著抑制了OGCs的增殖活力和迁移能力(P<0.01);RT-qPCR结果发现沉默OPN基因极显著抑制了核心蛋白聚糖2(DCN2)、细胞色素P450家族19亚家族A肽1(CYP19A1)和雌激素受体1(ESR1)的基因表达(P<0.01),显著促进了β-连环蛋白结合因子2(CTNNB2)、胱天蛋白酶3(Caspase-3)和Bcl-2关联X蛋白(Bax)的基因表达(P<0.05),对铁蛋白重链1(FTH1)、胱天蛋白酶9(Caspase-9)的基因表达无显著影响。结论：干扰OPN基因，可以有效抑制OGCs的增殖和迁移，降低繁殖相关基因的表达水平，同时促进细胞的凋亡进程，这一研究为进一步阐明OPN基因影响山羊繁殖率的分子机制奠定了基础。

关键词

OPN基因 / 贵州黑山羊 / 卵巢颗粒细胞 / 细胞增殖 / 繁殖相关基因