Ⅰ型干扰素敲除MDBK细胞系的构建及其对牛结节性皮肤病病毒增殖的促进作用

摘要

旨在提高牛结节性皮肤病病毒（LSDV）毒株在细胞中的增殖水平。通过比对LSDV XJ201901毒株在不同细胞中的增殖情况，发现牛肾细胞（MDBK）是其敏感细胞系。为了进一步优化病毒增殖条件，利用CRISPR/Cas9技术构建了Ⅰ型干扰素（IFN-Ⅰ）敲除的MDBK细胞系，并通过实时荧光定量PCR（qPCR）、半数组织细胞感染量(TCID₅₀)和Western blot试验对野生型与IFN-Ⅰ敲除MDBK细胞系中的病毒含量和蛋白表达量进行了评估。基因测序结果显示，IFN-Ⅰ敲除细胞系中存在碱基缺失导致的移码突变，证实基因敲除成功; q PCR、TCID₅₀和Western blot试验结果显示，IFN-Ⅰ敲除MDBK细胞系可以显著促进LSDV XJ201901毒株的复制。该研究为LSD疫苗的研发和病毒与细胞互作机制的探索奠定了基础。

关键词

CRISPR/Cas9 / Ⅰ型干扰素 / MDBK / 牛结节性皮肤病病毒