猪免疫球蛋白J链表达及抗血清的制备

摘要

旨在制备猪免疫球蛋白J链抗血清，为研究J链的免疫学功能提供材料。运用PCR扩增J链开放阅读框，并将其克隆至原核表达载体pET30a,选择测序成功的pET30a-J重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞中进行蛋白表达验证；将J链与弗氏完全佐剂混合后经背部皮下免疫新西兰大白兔制备抗血清；采用ELISA、Western blot和间接免疫荧光试验(IFA)对获得的抗血清进行功能验证。结果：猪免疫球蛋白J链在大肠杆菌中以包涵体形式表达，经变性复性后通过NI-NTA亲和层析的方法纯化出纯净的目的蛋白；ELISA检测结果显示，四免后兔血清中抗体效价可达1∶6 400;Western blot结果显示，获得的抗血清能与原核表达的J链特异性结合；为进一步验证抗血清的反应性，构建了pcDNA3.1-J重组载体，将其转染293T细胞，IFA与Western blot检测结果显示，本研究制备的抗血清能与真核表达的猪免疫球蛋白J链特异性结合，通过ELISA和Western blot检测抗血清与猪乳中J链的反应性，结果显示能与猪乳中的J链反应。综上表明，本研究成功制备出猪免疫球蛋白J链抗血清。

关键词

猪免疫球蛋白J链 / 原核表达 / 抗血清