猪滤泡辅助性T细胞转录因子BCL6抗血清的制备及功能验证

摘要

旨在制备猪滤泡辅助性T(Tfh)细胞转录因子B细胞淋巴瘤6(BCL6)抗血清。根据GenBank中猪BCL6开放阅读框，优化设计并合成pET30a-BCL6和pcDNA3.1-BCL6重组表达载体，将重组载体p ET30a-BCL6转化入大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，加入IPTG诱导表达BCL6蛋白，将纯化的目的蛋白与206佐剂混合乳化后经背部皮下免疫BALB/c小鼠，经过4次免疫后收集获得抗血清。采用ELISA检测血清抗体滴度，结果显示抗体水平随着免疫次数的增加而逐步升高，抗血清稀释至1∶16 000倍仍能与原核表达的BCL6蛋白反应;采用Western blot评价抗血清与原核表达BCL6蛋白的反应性，分析结果显示制备的抗血清可与原核表达BCL6蛋白特异性结合。为进一步验证抗血清与BCL6蛋白的反应性，将重组载体pc DNA3.1-BCL6转染HEK-293T细胞，采用Western blot评价抗血清的反应性，结果显示所制备的抗血清可与真核表达的BCL6蛋白特异性结合;采用间接免疫荧光(IFA)评价抗血清的反应性，IFA结果与Western blot结果一致，显示所制备的抗血清可与真核表达的BCL6蛋白特异性结合。综上，本研究成功制备了猪BCL6抗血清，为后期制备猪BCL6单克隆抗体及研究黏膜免疫过程中Tfh细胞的相关功能奠定了基础。

关键词

猪 / 滤泡辅助性T细胞 / 转录因子BCL6 / 抗血清

基金资助

国家自然科学基金区域联合项目重点项目(U22A20522); 甘肃省科技计划联合科研基金重点项目(24JRRA811)