弓形虫与宿主IL-12结合蛋白的筛选

摘要

旨在探索是否存在直接与宿主白细胞介素(IL)-12结合并调节其功能的弓形虫蛋白，以进一步解析弓形虫免疫逃逸的分子机制。通过免疫沉淀技术(IP)联合液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)分析，从弓形虫速殖子中筛选出39种能与小鼠IL-12结合的候选分子。根据基因注释与功能分析，从39种候选分子中选定弓形虫14-3-3、延伸因子-1α(EF-1α)、Ras相关蛋白1a(Rab1a)、β-微管蛋白(β-tubulin)及假定蛋白(HYP)进行结合验证。分别构建14-3-3、EF-1α、Rab1a、β-tubulin、HYP以及IL-12的真核重组蛋白表达系统并进行正反向免疫共沉淀，发现14-3-3、Rab1a与小鼠IL-12未产生直接结合，而β-tubulin、EF-1α可与IL-12产生正向结合，但无反向结合信号。此外，弓形虫HYP在人胚肾细胞(HEK 293T)表达系统不表达。本研究首次较为系统地探索了弓形虫蛋白与宿主IL-12的直接结合关系，为解析弓形虫免疫调控网络及开发相关干预策略提供了新视角。

关键词

弓形虫 / 细胞因子 / 白细胞介素-12 / 蛋白结合 / 免疫逃避