基于Sf9细胞培养表达鸭短喙侏儒综合征病毒VP2蛋白的工艺优化

摘要

旨在获得高表达的鸭短喙侏儒综合征病毒VP2抗原蛋白。本试验通过对接毒与表达工艺中pH值、Sf9细胞密度、接毒量、收获时间、搅拌转速和溶氧值等参数进行优化，考察VP2重组杆状病毒的增殖情况，收获病毒液，测定病毒含量变化；同时，对培养物进行VP2蛋白SDS-PAGE和Western blot分析，并采用SDS-PAGE灰度扫描测定蛋白含量。结果：在pH值维持6.8～7.2,接毒密度为1.0×10～6～2.0×10～6个/mL,感染复数（MOI）值为0.01～0.1,收获时间为接种后5～7 d,转速100～140 r/min,溶氧度控制在40%～80%时，重组杆状病毒生长较好，含量较高，达10^7.7～10^8.5 TCID₅₀/mL;均出现约65 kDa目的条带，蛋白表达量基本一致，达57μg/mL以上。根据优化的工艺参数在5 L反应器进行5批抗原生产验证，VP2蛋白表达量达58～63μg/mL,蛋白生产稳定，表达量高。

关键词

鸭短喙侏儒综合征 / 重组杆状病毒 / Sf9细胞 / 接毒工艺 / 表达生产工艺

基金资助

江苏农牧科技职业学院畜禽产业核心技术创新项目(NSF2021ZR02); 江苏省高等学校自然科学研究重大项目(21KJA230001)