猪丁型冠状病毒、猪A群轮状病毒多重TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立

摘要

旨在建立一种猪丁型冠状病毒(PDCoV)、猪A群轮状病毒(PoRV)的快速鉴别诊断方法，根据PDCoV的N基因、PoRV的VP6基因分别设计了检测引物及TaqMan探针，并设立猪源β-actin内参基因，经反应条件优化，对特异性、敏感性、重复性进行验证并初步应用于临床样品检测，最终成功建立了一个可通过β-actin进行质控、同时鉴别诊断PDCoV、PoRV多重TaqMan荧光定量PCR检测方法。结果：该方法可特异性扩增PDCoV、PoRV及猪源β-actin目标基因，与猪圆环病毒2型(PCV2)、猪圆环病毒3型(PCV3)、猪瘟病毒(CSFV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)、伪狂犬病病毒(PRV)、猪星状病毒(PAstV)的核酸无交叉反应，对PDCoV、PoRV及β-actin的最低检出限分别为1.64×10～2、1.65×10～2和5.99×10～3 copies/μL,重复性试验中组内及组间变异系数均低于2%,说明该方法具有特异、灵敏、稳定的特点。应用该方法对63份广西猪腹泻临床样品进行检测，结果与PDCoV、PoRV的商品化荧光定量PCR检测试剂盒的结果相一致。综上，本研究建立了一种可应用于临床、快速鉴别诊断猪腹泻样品中PDCoV与PoRV的多重TaqMan荧光定量PCR检测方法，该方法特异性好、敏感性高、操作便捷，可为PDCoV与PoRV的监测诊断与净化防控提供可行技术支撑。

关键词

猪丁型冠状病毒 / 猪A群轮状病毒 / 多重TaqMan荧光定量PCR

基金资助

国家现代农业产业技术体系广西创新团队建设专项(nycytxgxcxtd-2023-15-02); 南宁市科技重大专项(20232039); 广西基本科研业务费专项(22-4,23-3,24-3,24-7,24-11); 广西农业科技自筹经费项目(Z202225,Z202222,Z2023034); 广西兽医生物技术重点实验室开放基金项目(22-035-32-B-02,23-035-32-B-02,23-035-32-B-01)